【摘 要】
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利用小鼠HPRT基因组DNA片段和人工合成的含有FLP重组酶识别位点变异体FRT和F3 RT序列的寡核苷酸,构建了针对小鼠HPRT基因位点的置换型打靶载体pSP-HPRT-F-Neo-F3.经过限制酶
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利用小鼠HPRT基因组DNA片段和人工合成的含有FLP重组酶识别位点变异体FRT和F3 RT序列的寡核苷酸,构建了针对小鼠HPRT基因位点的置换型打靶载体pSP-HPRT-F-Neo-F3.经过限制酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后,将线性化了的打靶载体以电穿孔法导入ES细胞内,经G418和6-TG双药筛选和分子鉴定,得到了2个在HPRT位点整合有FLP重组酶"交换盒"F-Neo-F3结构的双交换重组ES细胞克隆,为建立基于FLP重组酶介导的盒式交换的高效、定点转基因体系创造了条件.
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