【摘 要】
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目的:建立real-time PCR定量检测毕赤酵母基因组DNA的残留量,提高重组生物制品的产品安全性。方法:以Thermo Fisher Piko Real 96扩增仪平台为基础,选择毕赤酵母GS115的r DNA
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目的:建立real-time PCR定量检测毕赤酵母基因组DNA的残留量,提高重组生物制品的产品安全性。方法:以Thermo Fisher Piko Real 96扩增仪平台为基础,选择毕赤酵母GS115的r DNA的5.8s RNA基因为靶基因设计扩增引物,提取酵母基因组DNA,稀释后作为扩增模板,建立实时-PCR定量检测方法,并进行检测限、精密度和回收率等方法学验证,用于重组产品宿主DNA残留的质量控制。结果:该方法检测灵敏度可达0.005 pg·μL-1,DNA浓度在0.005~500 pg·μL-1范围内线性良好,其标准曲线的相关系数为0.99以上。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高、可定量等优点,可用于重组产品中毕赤酵母菌残余DNA的定量测定。
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