论文部分内容阅读
摘 要:目的:探讨穿龙薯蓣无支架、树枝支架、木杆支架和网状支架等不同采光结构对药材质量的影响,从而确定适宜栽培方法。方法:HPLC法测药材中薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷含量。结果:薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷总含量分别是3.04%、3.95%、5.33%和4.86%,而野生穿龙薯蓣含量为4.04%。质量提高与光照强度增加有关。结论:网状支架提高穿龙薯蓣的质量,为其他藤本类药材栽培提供良好借鉴。
关键词:穿龙薯蓣 薯蓣皂苷 原薯蓣皂苷
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2011)04(b)-0090-01
Abstract: This study aimed to explore the effect of lighting frameworks such as non-shelf,branch-shelf, stick-shelf and network-shelf on quality of Chinese medicine from Dioscorea nipponica,a perennial twisted herbal liana.Methods:Determine the contents of the dioscin and protodioscin by HPLC. Results:The total contents of the dioscin and protodioscin were 3.04%,3.95%,5.33% and 4.86% respectively, but content from the wild was 4.04%,indicating that the drug quality on the light intensity.Conclusion:The increase of quality through network-shelf can offer good use for reference for other twining vine cultivation.
Key words:Dioscorea nipponica;Dioscin;Protodioscin
穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Makino又名穿山龙,为多年生草质藤本植物,主产于黑龙江、吉林和辽宁省东部山区,河北、内蒙古、河南、山西、陕西、甘肃等地亦有大量分布,分布区域较广泛。穿龙薯蓣以根茎入药,具有镇咳、祛痰、平喘、提高心血管功能等作用,临床用于治风寒湿痹,慢性气管炎,消化不良,劳损扭伤,疟疾,痈肿等疾病。由于资源匮乏,穿龙薯蓣东北地区近几年开始有大量栽培。藤本植物通常生长在林下,需缠绕于其它植物向上生长,光照较弱,而人工栽培在全光照条件下,二者在生态环境上具有较大的差异,藤本植物能否够适应较强的光照条件以及是否会对药材的质量产生影响是决定该技术能够广泛应用的重要方面。为此,本研究以穿龙薯蓣为研究对象,对不同采光条件下穿龙薯蓣的质量进行研究,以探讨穿龙薯蓣等草质藤本药材的高产措施及对药材质量的影响,从而指导药材的生产。
1 材料和方法
1.1 采光支架材料
高1m左右的树枝;高2m左右的木杆;植物支架网(宽2m,15cm×15cm)等。
1.2 仪器
LC-2010A型自动进样高效液相色谱仪,KDC-160HR高速冷冻离心机,AS3120-B超声震荡仪;日本岛津UVmini-1240型分光光度仪。
1.3 试药
薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷对照品购自中国药品生物制品检定所;乙腈(色谱级,美国迪马(DIK-MA)公司);娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司);其它均为分析级。
1.4 色谱条件
色谱柱:diamonsil C18(250×4.6mm, 5mm);流动相:乙腈-水梯度洗脱,0～5min乙腈29%等度;5min～5.5min29%线性变化到60%;5.5min～14min60%乙腈等度。柱温:35℃;流速:1mL/min;检测波长206nm。进样量:对照品溶液5mL,供试品溶液10mL。
1.5 对照品溶液的制备
精密称取薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷对照品各5mg,分别置5mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
1.6 供试品溶液的制备
采光条件:无支架,树枝支架,木杆支架和网状支架四个处理,每处理5m,6次重复,穿龙薯蓣的根茎于2010年10月2日采集,同时采集野生穿龙薯蓣作对照,洗净,室内阴干。
取药材细粉约0.5g,精密称定,置100mL具塞锥形瓶中,加35%乙醇5mL,密塞,称定重量,超声处理40min(55khz),放冷,用35%乙醇补足减失的重量,溶液3000r·min-1离心10min,取上清液,过0.45mm的微孔滤膜。
1.7 方法学考察
(1)线性关系考察。精密量取薯蓣皂苷对照品溶液和原薯蓣皂苷各1、2、4、6、8、10mL,注入液相色谱仪。以峰面积为横坐标,进样量(mg)为纵坐标进行线性回归。结果薯蓣皂苷回归方程为:Y=4×10-6X-0.293,r=0.9998,表明薯蓣皂苷在1.12mg～10.29mg具有良好的线性关系;原薯蓣皂苷回归方程为:Y=4.7×10-6X-3.59,r=0.9998,表明原薯蓣皂苷在1.02mg～10.2mg具有良好的线性关系。
(2)精密度试验。精密量取同一对照品溶液,重复进样6次,薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的RSD分别为2.0％和1.0%。
(3)稳定性试验。精密量取同一供试品溶液,分别于0、2、4、8、12h测定峰面积,结果薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的RSD分别为2.8％和1.9%(n=5),表明供试品溶液在12h内稳定。
(4)重现性试验。取同一批样品,按上述供试品溶的制备方法和色谱条件,重复测定6次,薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的RSD分别为0.67%和0.34%。
(5)回收率试验。精密称取已知含量的样品粉末约0.25g,按低、中、高三种浓度加入对照品溶液制备供试品溶液,按上述供试品溶液的制备方法和测定条件,测定薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的含量,计算回收率。结果薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的平均回收率分别为98.6%和98.4%,RSD分别为1.5％和1.6%(n=6)。
2 结果与讨论
2.1 不同采光结构穿龙薯蓣药材质量的比较
生态胁迫能促进道地药材的质量形成,植物在胁迫条件下次生代谢产物增多,这是一种较为普遍的现象,这种现象往往是受某些或某个因子的限制所致。胁迫下产生活性氧是植物细胞一个普遍特征,也是主要的特征。活性氧的水平也通常由抗氧化酶的活力反映出来,抗氧化酶活性的变化也反映了生态环境的改变对次生代谢的作用,因此,木杆支架和网状支架的两种主要成分薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的含量较高,均高于野生品,见表1。
综合以上分析,采用网状支架的采光结构是栽培生产的一项优质措施,该结果可为其他草质藤本植物栽培所借鉴。
参考文献
[1] 黄璐琦,陈美兰,肖培根.中药材道地性研究的现代生物学基础及模式假说[J].中国中药杂志,2004,29(6):494～497.
[2] 赵福庚,何龙飞,罗庆云.植物逆境生理生态学[M].北京:化学工业出版社,2004:6.
关键词:穿龙薯蓣 薯蓣皂苷 原薯蓣皂苷
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2011)04(b)-0090-01
Abstract: This study aimed to explore the effect of lighting frameworks such as non-shelf,branch-shelf, stick-shelf and network-shelf on quality of Chinese medicine from Dioscorea nipponica,a perennial twisted herbal liana.Methods:Determine the contents of the dioscin and protodioscin by HPLC. Results:The total contents of the dioscin and protodioscin were 3.04%,3.95%,5.33% and 4.86% respectively, but content from the wild was 4.04%,indicating that the drug quality on the light intensity.Conclusion:The increase of quality through network-shelf can offer good use for reference for other twining vine cultivation.
Key words:Dioscorea nipponica;Dioscin;Protodioscin
穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Makino又名穿山龙,为多年生草质藤本植物,主产于黑龙江、吉林和辽宁省东部山区,河北、内蒙古、河南、山西、陕西、甘肃等地亦有大量分布,分布区域较广泛。穿龙薯蓣以根茎入药,具有镇咳、祛痰、平喘、提高心血管功能等作用,临床用于治风寒湿痹,慢性气管炎,消化不良,劳损扭伤,疟疾,痈肿等疾病。由于资源匮乏,穿龙薯蓣东北地区近几年开始有大量栽培。藤本植物通常生长在林下,需缠绕于其它植物向上生长,光照较弱,而人工栽培在全光照条件下,二者在生态环境上具有较大的差异,藤本植物能否够适应较强的光照条件以及是否会对药材的质量产生影响是决定该技术能够广泛应用的重要方面。为此,本研究以穿龙薯蓣为研究对象,对不同采光条件下穿龙薯蓣的质量进行研究,以探讨穿龙薯蓣等草质藤本药材的高产措施及对药材质量的影响,从而指导药材的生产。
1 材料和方法
1.1 采光支架材料
高1m左右的树枝;高2m左右的木杆;植物支架网(宽2m,15cm×15cm)等。
1.2 仪器
LC-2010A型自动进样高效液相色谱仪,KDC-160HR高速冷冻离心机,AS3120-B超声震荡仪;日本岛津UVmini-1240型分光光度仪。
1.3 试药
薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷对照品购自中国药品生物制品检定所;乙腈(色谱级,美国迪马(DIK-MA)公司);娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司);其它均为分析级。
1.4 色谱条件
色谱柱:diamonsil C18(250×4.6mm, 5mm);流动相:乙腈-水梯度洗脱,0～5min乙腈29%等度;5min～5.5min29%线性变化到60%;5.5min～14min60%乙腈等度。柱温:35℃;流速:1mL/min;检测波长206nm。进样量:对照品溶液5mL,供试品溶液10mL。
1.5 对照品溶液的制备
精密称取薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷对照品各5mg,分别置5mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
1.6 供试品溶液的制备
采光条件:无支架,树枝支架,木杆支架和网状支架四个处理,每处理5m,6次重复,穿龙薯蓣的根茎于2010年10月2日采集,同时采集野生穿龙薯蓣作对照,洗净,室内阴干。
取药材细粉约0.5g,精密称定,置100mL具塞锥形瓶中,加35%乙醇5mL,密塞,称定重量,超声处理40min(55khz),放冷,用35%乙醇补足减失的重量,溶液3000r·min-1离心10min,取上清液,过0.45mm的微孔滤膜。
1.7 方法学考察
(1)线性关系考察。精密量取薯蓣皂苷对照品溶液和原薯蓣皂苷各1、2、4、6、8、10mL,注入液相色谱仪。以峰面积为横坐标,进样量(mg)为纵坐标进行线性回归。结果薯蓣皂苷回归方程为:Y=4×10-6X-0.293,r=0.9998,表明薯蓣皂苷在1.12mg～10.29mg具有良好的线性关系;原薯蓣皂苷回归方程为:Y=4.7×10-6X-3.59,r=0.9998,表明原薯蓣皂苷在1.02mg～10.2mg具有良好的线性关系。
(2)精密度试验。精密量取同一对照品溶液,重复进样6次,薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的RSD分别为2.0％和1.0%。
(3)稳定性试验。精密量取同一供试品溶液,分别于0、2、4、8、12h测定峰面积,结果薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的RSD分别为2.8％和1.9%(n=5),表明供试品溶液在12h内稳定。
(4)重现性试验。取同一批样品,按上述供试品溶的制备方法和色谱条件,重复测定6次,薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的RSD分别为0.67%和0.34%。
(5)回收率试验。精密称取已知含量的样品粉末约0.25g,按低、中、高三种浓度加入对照品溶液制备供试品溶液,按上述供试品溶液的制备方法和测定条件,测定薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的含量,计算回收率。结果薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的平均回收率分别为98.6%和98.4%,RSD分别为1.5％和1.6%(n=6)。
2 结果与讨论
2.1 不同采光结构穿龙薯蓣药材质量的比较
生态胁迫能促进道地药材的质量形成,植物在胁迫条件下次生代谢产物增多,这是一种较为普遍的现象,这种现象往往是受某些或某个因子的限制所致。胁迫下产生活性氧是植物细胞一个普遍特征,也是主要的特征。活性氧的水平也通常由抗氧化酶的活力反映出来,抗氧化酶活性的变化也反映了生态环境的改变对次生代谢的作用,因此,木杆支架和网状支架的两种主要成分薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷的含量较高,均高于野生品,见表1。
综合以上分析,采用网状支架的采光结构是栽培生产的一项优质措施,该结果可为其他草质藤本植物栽培所借鉴。
参考文献
[1] 黄璐琦,陈美兰,肖培根.中药材道地性研究的现代生物学基础及模式假说[J].中国中药杂志,2004,29(6):494～497.
[2] 赵福庚,何龙飞,罗庆云.植物逆境生理生态学[M].北京:化学工业出版社,2004:6.