【摘 要】
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目的寻找并验证miRNA-449的靶基因,探讨miRNA-449调控SH-SY5Y细胞增殖活性的分子机制。方法检测神经母细胞瘤及其癌旁组织中的miRNA-449及NOTCH1蛋白的表达并分析其相关性;生
【机 构】
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第二军医大学基础部神经生物学教研室
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目的寻找并验证miRNA-449的靶基因,探讨miRNA-449调控SH-SY5Y细胞增殖活性的分子机制。方法检测神经母细胞瘤及其癌旁组织中的miRNA-449及NOTCH1蛋白的表达并分析其相关性;生物信息学预测miRNA-449与NOTCH1基因3’UTR区的结合靶位,并通过荧光素酶报告基因法进行验证;化学合成miRNA-449模拟物、miRNA-449抑制剂及miRNA-449错义序列,经脂质体转染至SH-SY5Y细胞,转染后48 h,real-time PCR检测细胞中miRNA-449表达,Western blotting检测细胞中NOTCH1蛋白表达;转染后24、48和72 h,CCK-8法检测肿瘤细胞增殖活性。结果与癌旁组织比较,肿瘤组织中miRNA-449表达明显升高,NOTCH1蛋白表达则明显降低,差异均有统计学意义(P=0.002和P=0.021)。miRNA-449在NOTCH1基因3’UTR区存在结合位点5’-CACTGCC-3’,并且通过结合位点对NOTCH1基因表达进行负调控。miRNA-449模拟物转染SH-SY5Y细胞,明显抑制细胞内NOTCH1蛋白表达(P=0.006);而miRNA-449抑制剂转染细胞后可明显增强胞内NOTCH1蛋白表达(P=0.018)。在48和72 h时间点,miRNA-449模拟物可明显抑制SH-SY5Y细胞增殖活性,而miRNA-449抑制剂则使细胞增殖活性进一步增强。结论 miRNA-449可以通过抑制其靶基因NOTCH1表达抑制SH-SY5Y细胞增殖活性。
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