【摘 要】
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目的:直接针对秀丽线虫进行PCR反应,以便快速扩增基因组DNA,从而提高钓取目的基因和鉴定基因组是否发生突变的效率。方法:根据生物信息学分析,针对不同基因设计单重或多重PCR
【机 构】
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西北农林科技大学生命科学学院,军事医学科学院放射与辐射医学研究所
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(2006CB504100);国家自然科学基金(30900862,30800196,30771230);国家科技重大专项(2009ZX09503-002,2009ZX09301-002,2009ZX09103-616)
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目的:直接针对秀丽线虫进行PCR反应,以便快速扩增基因组DNA,从而提高钓取目的基因和鉴定基因组是否发生突变的效率。方法:根据生物信息学分析,针对不同基因设计单重或多重PCR引物;在不含Taq DNA聚合酶的PCR反应体系中加入蛋白酶K消化秀丽线虫染色体中的组蛋白,然后加入Taq酶,直接针对野生型或突变型秀丽线虫个体进行PCR反应,无须提前制备基因组DNA。结果:用该方法能直接从秀丽线虫体内的基因组DNA中扩增出目的基因片段,与常规预先制备基因组DNA为模板的扩增产物条带位置一致,且特异性更高。同时,针对不同基因的多重PCR亦能扩增出理想的目的基因片段。结论:直接针对秀丽线虫进行PCR能够实现基因组DNA的快速扩增和鉴定,在保证反应特异性的同时,还能显著提高PCR反应的灵敏度,为秀丽线虫基因组的快速鉴定提供了一种便捷方法。
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