【摘 要】
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目的探讨嗜肺军团菌主要外膜蛋白（MOMP）对RAW264. 7巨噬细胞吞噬功能和趋化功能的影响并探讨其机制。方法采用MOMP与RAW264. 7巨噬细胞进行体外共培养,用CCK-8法检测MOMP对RAW2
【机 构】
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宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系; 宁夏医科大学生育力保持省部级共建教育部重点实验室,基础医学院病原生物学与免疫学系;
【基金项目】
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西部一流学科-人才培养(30181602);西部一流学科-开放课题(30181603)
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目的探讨嗜肺军团菌主要外膜蛋白（MOMP）对RAW264. 7巨噬细胞吞噬功能和趋化功能的影响并探讨其机制。方法采用MOMP与RAW264. 7巨噬细胞进行体外共培养,用CCK-8法检测MOMP对RAW264. 7巨噬细胞的毒性,确定半数抑制浓度（IC50）。采用（1. 14、0. 57、0. 28）μg/m L MOMP分别处理RAW264. 7巨噬细胞,并设细胞对照组。RAW264. 7巨噬细胞处理24、48、72 h,收集细胞和培养上清,用中性红吞噬实验检测巨噬细胞的吞噬功能;用TranswellTM小室检测巨噬细胞的趋化功能; ELISA检测细胞培养上清单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和白细胞介素10（IL-10）的含量;实时定量PCR检测巨噬细胞核苷酸结合寡聚结构域1（NOD1）、NOD2、受体相互作用蛋白2（RIP2） mRNA水平,Western blot法检测NOD1、NOD2、RIP2的蛋白水平。结果 CCK-8法检测MOMP对RAW264. 7巨噬细胞的IC50为5. 69μg/m L;与对照细胞相比,MOMP处理引起RAW264. 7巨噬细胞吞噬功能降低且呈剂量和时间依赖性;随着MOMP剂量的增加,巨噬细胞的趋化能力及细胞培养上清中MCP-1、IL-10的分泌水平增加,并在36 h达到峰值; NOD2、RIP2的mRNA和蛋白表达水平也增加,NOD2和RIP2的mRNA水平在12 h达到高峰,蛋白水平在24 h达到峰值。结论 MOMP抑制RAW264. 7巨噬细胞的吞噬功能并增强其趋化功能,与激活NOD2/RIP2信号通路有关。
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