【摘 要】
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用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)A06株病毒抗原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分
【机 构】
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湖南农业大学动物医学院; 深圳出入境检验检疫局动植物检疫技术中心;
【基金项目】
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国家质检总局科技项目(2008IK262-2);深圳出入境检验检疫局项目(SZ2007038)
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用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)A06株病毒抗原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3D12、4E10、6E2和7G6。其细胞培养上清效价分别为1∶256、1∶512、1∶512和1∶256,小鼠腹水效价分别为1∶1.024×106、1∶2.048×106、1∶1.024×106和1∶2.048×106。亚型鉴定表明,3D12、4E10、6E2和7G6分别为IgG2b、IgG2b、IgG1和IgG2a。ELISA检测结果显示,4种PRRSV单克隆抗体仅与PRRSV反应,不与其他病毒反应,表明均为抗PRRSV的型特异性单克隆抗体。对单克隆抗体腹水液进行IgG提取纯化,SDS-PAGE电泳验证,仅出现两条清晰条带,无杂带出现,证明纯化效果较好。这4种单克隆抗体的获得,为建立PRRSV检测方法提供了强有力的工具。
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