自体PRP促进人脂肪来源干细胞成骨分化的体外实验研究

来源 :中国修复重建外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xq111
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目的探讨自体PRP对体外培养人脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖及成骨分化的影响。方法取自愿捐献吸脂术获取的脂肪组织进行分离培养ADSCs,倒置显微镜下观察细胞生长情况。将第3代ADSCs分别行成脂、成软骨定向诱导培养鉴定,并行CD29及CD44免疫荧光染色观察。取第3代ADSCs分别采用含10mL/LPRP的成骨诱导培养基(PRP组)和不含PRP的成骨诱导培养基(对照组)进行培养,倒置显微镜观察细胞生长情况,培养后1、2、3、4、5d采用MTT法检测细胞增殖活性;7、14、21、28d行ALP活性检测,另取培养7、14d的PRP组细胞行ALP染色观察;14d时行PRP组茜素红染色检测钙结节形成情况。结果倒置显微镜下第3代ADSCs多为梭形,倍增时间约35h。成脂及成软骨诱导鉴定均为阳性,免疫荧光染色CD29和CD44呈阳性。MTT法示PRP组1、2、3、4、5d的吸光度值分别为0.137±0.015、0.219±0.023、0.367±0.031、0.586±0.039、0.948±0.046,对照组分别为0.081±0.009、0.115±0.012、0.162±0.017、0.242±0.025、0.356±0.032,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。成骨诱导7d后,PRP组ALP染色阳性,细胞胞浆呈灰黑色,可见黑色沉淀;14d后阳性细胞增多。ALP活性检测示PRP组7、14、21、28d细胞活性值分别为23.96±2.05、41.26±3.38、38.12±3.03、35.89±2.24,对照组分别为17.83±1.62、26.64±2.37、23.85±1.99、20.78±1.81,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。成骨诱导14d后,茜素红染色示PRP组钙结节形成。结论体外培养时,自体PRP可促进人ADSCs的增殖并诱导成骨分化,为骨组织工程提供一种新的种子细胞来源。
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