吉林省急性弛缓性麻痹病例和健康人群中柯萨奇病毒A组4型的基因特征分析

来源 :中国疫苗和免疫 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangdalu
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目的 了解吉林省2006年和2008年急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例和健康人群中分离到的柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus Group A Type 4,CVA4)的基因特征,探索特定血清型肠道病毒(Enterovirus,EV)与AFP病例之间的关系.方法 从75例AFP病例和60例边境地区健康人群中采集原始粪便标本,使用人横纹肌肉瘤(Human Rhabdomyosarcoma,RD)细胞和人喉癌(Human Laryngeal Carcinoma,Hep-2)上皮细胞进行病毒分离,阳性标本用EV组合血清进行中和试验鉴定血清型,未能定型的标本用EV VP4-VP2蛋白编码区引物通过逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)进行扩增,扩增阳性标本通过基因序列分析鉴定血清型.从中挑选CVA4扩增全长VP1编码区片段并进行核苷酸序列测定和分析,测序结果利用Bioedit软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析,用Mega软件建立基因进化树,进行基因亲缘关系分析.结果 使用RD细胞从AFP病例粪便标本中分离到5株CVA4,从健康人群粪便标本中分离到4株CVA4.这9株病毒用EV组合血清均无法定型,经过VP4-VP2测序的方法鉴定为CVA4.9株病毒VP1编码区的核苷酸和氨基酸同源性分别为88.3%~100%和98%~100%,与CVA4原型株CVA4/High Point(海波因特)/USA(美国)/1950的核苷酸和氨基酸同源性分别为83.3%~85.6%和97.7%~98.6%.其中4株来自AFP病例的病毒具有高度的基因同源性(99.6%~100%),这4株病毒与来自健康人群的病毒比较,核苷酸和氨基酸同源性分别为88.3%~88.9%和98.0%~98.6%.在基因进化树上显示,这4株来自AFP病例的CVA4构成一个独立的分支.结论 基因进化分析表明,4株来自AFP病例的毒株VP1编码区的基因特征,与来自健康人群的毒株的基因特征显著不同.
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