论文部分内容阅读
目的:利用网络药理学探究附子-淫羊藿药对治疗慢性心功能不全的作用机制,并通过心肌细胞H9c2和斑马鱼模型进行验证.方法:TCM SP采集搜索附子、淫羊藿的目标活性成分,UniProt得到相对应的靶点基因.OMIM,GeneCards获取与慢性心功能不全相关的靶点信息.Cytoscape 3.6.1软件,生成靶点网络图.MetaScape数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)的分析,基因本体(GO)生物过程,分子功能,细胞组成,京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.建立心肌细胞H9c2缺氧复氧模型,噻唑蓝(MTT)法测定促增殖效果,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定B淋巴细胞瘤-2相关的X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),蛋白激酶B(PKB/Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),细胞外调节蛋白激酶(ERK),磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK),聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达.建立血管内皮生长因子酪氨酸酶抑制剂Ⅱ(VRI)诱导的斑马鱼节间血管损伤模型,验证促血管新生作用.结果:得到药对活性成分28个,209个靶点,1 296个疾病靶点,药对与疾病共同基因靶点94个.PPI聚类提示药对可能通过细胞分化、细胞代谢、血管生成等途径干预慢性心功能不全.GO富集提示药对可能通过改变细胞迁移,血管发育和生成等生物过程治疗慢性心功能不全.10 mg· L-1的淫羊藿,10 mg·L-1的药对能够促进H9c2的增殖(P＜0.05),10 mg·L-1的药对能够上调H9c2的Bcl-2,Bcl-2/Bax,PARP的表达(P＜0.05),降低Caspase-3,Akt,ERK的表达(P＜0.05).药对在0.3,0.1 g·L-1的质量浓度下有明显的促血管新生的作用(P＜0.05).结论:附子-淫羊藿药对可以通过提高Bcl-2,PARP,提高Bcl-2/Bax的比值,降低Caspase-3,Akt,ERK的表达,实现H9c2的缺氧条件下的促增殖作用,同时可以保护斑马鱼损伤的血管,从而通过多成分、多靶点、多途径的治疗慢性心功能不全.