重组猪瘟病毒E2基因逆转录病毒载体的构建及其表达活性

来源 :中国兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:soul566
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从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT—PCR得到了CSFVC-株结构蛋白E2基因,定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro,经PCR、酶切和序列分析鉴定,获取阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载pVSV—G共转染GP2—293细胞,收获假型病毒,并在Polybrene的介导下感染PK15细胞,嘌呤霉素筛选表达猪瘟E2基因的细胞株。通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA检测表明,所筛的细胞细胞系能稳定表达猪瘟E2基因,而且表达产物具有良好的生物学活性。
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