【摘 要】
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目的:观察蛇六谷主要成分魔芋葡甘露聚糖(konjac glucomannan,KGM)对大肠癌细胞的逆转耐药作用,并探究其可能的作用机制.方法:构建HCT-8/5-FU耐药细胞株,采用MTT法检测并计算HCT-8/5-FU细胞对5-FU的耐药指数(RI),筛选出最佳KGM浓度后检测其对HCT-8/5-FU细胞的逆转耐药作用;采用流式细胞术检测KGM、5-FU单用或联用对HCT-8/5-FU细胞凋亡的影响;Western blot检测各实验组细胞凋亡相关蛋白以及内质网应激信号通路相关蛋白的表达情况.结果:H
【机 构】
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杭州市中医院·浙江杭州310007
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目的:观察蛇六谷主要成分魔芋葡甘露聚糖(konjac glucomannan,KGM)对大肠癌细胞的逆转耐药作用,并探究其可能的作用机制.方法:构建HCT-8/5-FU耐药细胞株,采用MTT法检测并计算HCT-8/5-FU细胞对5-FU的耐药指数(RI),筛选出最佳KGM浓度后检测其对HCT-8/5-FU细胞的逆转耐药作用;采用流式细胞术检测KGM、5-FU单用或联用对HCT-8/5-FU细胞凋亡的影响;Western blot检测各实验组细胞凋亡相关蛋白以及内质网应激信号通路相关蛋白的表达情况.结果:HCT-8/5-FU细胞相对于HCT-8细胞对5-FU的敏感性显著降低,RI为10.12;KGM能够抑制HCT-8/5-FU细胞生长,且呈剂量依赖性,与5-FU联用能够增加HCT-8/5-FU细胞对5-FU的敏感性;与单独用药相比,KGM和5-FU联合用药能够显著增加细胞凋亡率;Western blot结果显示KGM与5-FU联用能够显著上调HCT-8/5-FU细胞内磷酸化半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、磷酸化半胱氨酸蛋白酶-9(cleaved caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-elf2α)、转录激活因子4(ATF4)以及C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白含量,下调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白含量.结论:魔芋葡甘露聚糖通过调控PERK-elf2α-ATF4信号通路,介导内质网应激,进而逆转大肠癌细胞5-FU耐药.
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