【摘 要】
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目的:研究肿瘤坏死因子死亡受体(DR)4去甲基化对髓性白血病K562细胞增殖、凋亡的影响.方法:取对数期K562细胞,采用地西他滨(DCA)0、0.8、1.6、3.2 μmol/L干预,分别设为对照
【机 构】
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河南科技大学第一附属医院血液科,河南洛阳471000;新乡医学院,河南新乡453003
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目的:研究肿瘤坏死因子死亡受体(DR)4去甲基化对髓性白血病K562细胞增殖、凋亡的影响.方法:取对数期K562细胞,采用地西他滨(DCA)0、0.8、1.6、3.2 μmol/L干预,分别设为对照、DCA低剂量、DCA中剂量和DCA高剂量4组.取对照组细胞,采用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)0.5 μg/ml干预24 h,设置为TRAIL组;取DCA高剂量组细胞,采用TRAIL 0.5 μg/ml干预24 h,设置为DCA高剂量+TRAIL组.甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测对照组和DCA低、中、高剂量组DR4基因启动子甲基化状态;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测对照组和DCA低、中、高剂量组DR4 mRNA及蛋白相对表达量;二甲基噻唑(MTT)法检测对照组、DCA高剂量组、TRAIL组、DCA高剂量+TRAIL组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测对照组、DCA高剂量组、TRAIL组、DCA高剂量+TRAIL组细胞的凋亡率.结果:对照组细胞呈甲基化阳性状态,DCA低、中、高剂量组甲基化条带亮度逐渐降低至消失,DCA高剂量组呈甲基化阴性状态;对照组和DCA低、中、高剂量组DR4 mRNA及蛋白相对表达量依次升高(r=0.624、0.704);对照、DCA高剂量、TRAIL、DCA高剂量+TRAIL组24、48和72 h增殖抑制率、凋亡率依次升高(r=0.653、0.754、0.709,0.725).结论:DCA可逆转ML K562细胞中DR4基因启动子甲基化水平,上调DR4表达,可能会增强TRAIL对K562细胞的增殖抑制及凋亡促进作用.
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