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目的 卵巢叶酸受体α(αFR)在上皮性卵巢癌中高表达.文章拟构建靶向 αFR的嵌合抗原受体(CAR)修饰NK-92细胞(NK-92-αFR-CAR),并验证其对αFR阳性靶细胞的杀伤效能,为卵巢癌的临床治疗提供新策略.方法 选择偏爱密码子技术设计人源化抗αFR抗原的CAR分子基因;构建慢病毒表达载体pLenti-αFR-CAR;包装慢病毒并感染NK-92细胞;Western blot、qPCR及流式细胞术检测αFR-CAR分子在NK-92细胞中的表达效率.LDH释放实验和ELISA检测NK-92-αFR-CAR细胞对αFR阳性卵巢癌细胞的杀伤活性.结果 双酶切pLenti-αFR-CAR重组质粒可见分子质量和αFR-CAR分子一致的基因片段.Western blot和qPCR证明αFR-CAR分子在NK-92细胞中确有表达,并且经嘌呤霉素筛选后,αFR-CAR的表达效率超过90％.NK-92-αFR-CAR细胞对卵巢癌细胞的杀伤效应及细胞因子分泌水平呈抗原依赖性,即肿瘤细胞表面αFR表达水平越高,NK-92-αFR-CAR细胞对其杀伤效应越强.NK-92-αFR-CAR细胞与SK-OV-3细胞或A2780细胞共培养后,其IFN-γ分泌水平(5007.81±180.37、2668.30±180.37)较NK-92细胞(360.80±8.44、285.86±12.39)和NK-92-EV细胞(378.75±21.76、292.10±21.76)表达更高(P<0.01);TNF-α分泌水平(964.27±74.95、585.73±83.53)较NK-92细胞(247.92±5.96、231.03±10.47)和NK-92-EV细胞(230.04±13.66、215.13±7.89)表达更高(P<0.01).但与A-431细胞共培养,3种细胞中IFN-γ 和TNF-α 表达差异无统计学意义(P<0.05).结论 NK-92-αFR-CAR细胞具有分泌大量IFN-γ 和TNF-α 细胞因子并特异杀伤αFR阳性卵巢癌细胞的能力,这为NK-92-αFR-CAR细胞进入后续的临床前和临床研究奠定了基础.