【摘 要】
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目的:构建重组表达质粒pET-32c/PF4,并在原核中进行表达,以探讨其对白血病细胞系(HEL)细胞增殖的作用.方法:通过PCR方法从含有PF4基因的PQE-60/PF4质粒中扩增PF4,用NcoⅠ/Hin
【机 构】
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中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所
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目的:构建重组表达质粒pET-32c/PF4,并在原核中进行表达,以探讨其对白血病细胞系(HEL)细胞增殖的作用.方法:通过PCR方法从含有PF4基因的PQE-60/PF4质粒中扩增PF4,用NcoⅠ/Hind Ⅲ双酶切,克隆到原核表达质粒pET-32C中,使之在BL21表达,Ni-Chelating Sepharose 亲和柱纯化,用细胞集落形成方法研究重组PF4对HEL的抑制作用.结果:菌株筛选后在大肠杆菌中获得可溶性高效表达,重组PF4占菌体总蛋白的22%.肠激酶酶切除去N-端融合部分,获得了高纯度
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