探究载脂蛋白A5(Apo A5)对人脂肪间充质干细胞(AMSC)成脂分化的影响。
方法经中南大学湘雅二医院伦理委员会批准及患者知情同意后,获取2015年2至7月在我院进行腹部外科手术患者皮下脂肪组织,共40例患者,每次获取脂肪组织约10 g。通过胶原酶消化法获取人AMSC,经成脂诱导剂诱导分化为成熟脂肪细胞,分别以600、1 200 ng/ml Apo A5蛋白干预细胞,作为实验组;不加Apo A5干预的细胞为对照组;于促分化第7、14、21天收获细胞,观察Apo A5对脂滴形态学、油红O吸光度(A)492 nm、甘油三酯(TG)含量,以及成脂标志物基因表达水平影响。
结果(1)分光光度计检测油红O吸光度值结果:干预至第7、14和21天,600、1 200 ng/ml Apo A5干预组细胞油红O的A492 nm均低于对照组[(第7天:分别为145.6±21.1、110.5±31.5比195.4±35.7,P均<0.05;第14天:分别为289.2±24.2、250.4±45.2比341.6±34.5,P均<0.05;第21天:分别为431.9±33.2、374.7±26.4比488.2±22.5,P均<0.05]。(2)TG定量检测试剂盒检测Apo A5干预组细胞内TG含量变化结果:干预至第7、14和21天,600、1 200 ng/ml Apo A5干预的细胞内TG含量均低于对照组[第7天:(203.1±22.6)、(174.2±25.8)nmol/mg蛋白比(266.2±23.7)nmol/mg蛋白,P均<0.05;第14天:分别为(332.5±23.2)、(231.1±22.2)nmol/mg蛋白比(452.2±16.4)nmol/mg蛋白,P均<0.05;第21天:分别为(482.8±21.2)、(294.2±29.9)nmol/mg蛋白比(597.2±22.1)nmol/mg蛋白,P均<0.05]。(3)实时PCR检测结果:干预至第7、14和21天,600、1 200 ng/ml的Apo A5干预组aP2基因表达水平均低于对照组(P均<0.05),且细胞内脂肪酸合成酶(FAS)及脂滴包被蛋白的基因表达水平也低于对照组(P均<0.05)。
结论本研究成功分离并培养人AMSC;Apo A5可通过抑制AMSC内脂滴形成,降低细胞内TG含量及成脂标志物基因表达水平,最终抑制AMSC分化为成熟脂肪细胞。