【摘 要】
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目的将Toll样受体(TLR4)野生型及突变型(包括单突变和双突变)基因分别转入HepG2细胞,建立稳定表达TLR4蛋白的细胞株。方法 PCR扩增用于合成TLR4的c DNA,设计引物应用PCR点突
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目的将Toll样受体(TLR4)野生型及突变型(包括单突变和双突变)基因分别转入HepG2细胞,建立稳定表达TLR4蛋白的细胞株。方法 PCR扩增用于合成TLR4的c DNA,设计引物应用PCR点突变的方法合成1196T及896G单突变质粒和TLR4-1196T,896G双突变质粒。经慢病毒包装后,将合成的p LVX-TLR4-Puro、p LVX-TLR4(A-G)-Puro、p LVX-TLR4(C-T)-Puro、p LVX-TLR4(A-G,C-T)-Puro质粒转染HepG2细胞。在细胞贴壁后加入嘌呤霉素进行筛选;Western blot检测各组细胞TLR4的表达量。结果嘌呤霉素筛选出含有抗性基因的细胞,说明TLR4重组质粒成功转入细胞;Western blot结果表明TLR4在HepG2细胞中稳定过表达。结论成功构建了4组TLR4过表达的细胞株,为研究TLR4基因多态性对HepG2细胞生物学功能的影响奠定基础。
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