【摘 要】
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目的 研究石蒜碱对肝癌H22细胞荷瘤小鼠红细胞膜结构功能的影响.方法 通过抑瘤率实验、生命延长率实验、流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率实验,验证石蒜碱的体内抗肿瘤活性;采用试剂盒测定红细胞膜总蛋白、胆固醇和唾液酸含量,考察石蒜碱对H22荷瘤小鼠红细胞膜主要组分的影响;采用荧光偏振法检测红细胞膜流动性,荧光染色法检测红细胞膜封闭度,验证石蒜碱对H22荷瘤小鼠红细胞膜结构功能的影响;采用三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)酶活性检测试剂盒、荧光分光光度计、激光共聚焦扫描显微镜、Wes
【机 构】
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哈尔滨商业大学药物工程技术研究中心,黑龙江哈尔滨 150076;国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心,黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学药物工程技术研究中心,黑龙江哈尔滨 150076;国家教
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目的 研究石蒜碱对肝癌H22细胞荷瘤小鼠红细胞膜结构功能的影响.方法 通过抑瘤率实验、生命延长率实验、流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率实验,验证石蒜碱的体内抗肿瘤活性;采用试剂盒测定红细胞膜总蛋白、胆固醇和唾液酸含量,考察石蒜碱对H22荷瘤小鼠红细胞膜主要组分的影响;采用荧光偏振法检测红细胞膜流动性,荧光染色法检测红细胞膜封闭度,验证石蒜碱对H22荷瘤小鼠红细胞膜结构功能的影响;采用三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)酶活性检测试剂盒、荧光分光光度计、激光共聚焦扫描显微镜、Western blotting法,检测石蒜碱对H22荷瘤小鼠红细胞膜离子通道相关因子活性的影响;采用Western blotting法检测石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞内活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达的影响.结果 石蒜碱能够显著抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长、有效延长H22荷瘤小鼠生存时间,并且能够诱导H22荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡(P＜0.05、0.01);石蒜碱能够增加H22荷瘤小鼠红细胞膜总蛋白、唾液酸和胆固醇含量,同时提高红细胞膜流动性和封闭度,增强H22荷瘤小鼠红细胞膜Na+,K+-ATP、Ca2+,Mg2+-ATP酶活性,升高H22荷瘤小鼠红细胞内pH值,降低红细胞内H+、Ca2+、Cl-浓度,增强H22荷瘤小鼠红细胞对HCO3-/Cl-转运活性,升高Band3蛋白表达水平(P＜0.01):石蒜碱能够升高H22荷瘤小鼠肿瘤细胞内cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9蛋白表达水平,升高促凋亡蛋白Bax表达、降低抑凋亡蛋白Bcl-2表达,使Bcl-2/Bax降低(P＜0.01).结论 石蒜碱对H22荷瘤小鼠具有抗肿瘤作用,能够通过调控H22荷瘤小鼠红细胞膜组成结构,提高细胞膜离子通道的活性,在离子通道之间建立联系相互促进,通过这种相互促进作用来调节胞内酸碱度、离子平衡,使红细胞膜结构功能得到改善,进而增强红细胞免疫功能,并调控肿瘤细胞内凋亡相关蛋白表达,激活肿瘤细胞凋亡相关因子,启动肿瘤细胞凋亡程序,从而发挥抗肿瘤作用.
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