研究Wnt/β-catenin信号通路在0.5 GyX线促进成骨细胞分化中扮演的重要作用及分子机制。
方法成骨细胞接受0.5 Gy线照射后流式细胞仪检测细胞凋亡,通过检测检测骨分化标志物Col1α、ALP、OCN蛋白表达水平评估成骨细胞分化情况,应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)及免疫印迹检测Wnt信号通路中关键分子的表达,评估特异性抑制剂XAV939阻断Wnt/β-Catenin通路后0.5 Gy X线照射对成骨细胞分化的影响。
结果0.5 GyX线照射导致MC3T3-E1细胞骨分化标志物蛋白表达发生动态变化。0.5 GyX线照射后4 d成骨细胞Col1α蛋白表达水平下降(34.5%±5.8%, t=9.912,P<0.001),照射后10 d表达增加(162.5%±6.5%,t=2.673,P<0.05)。OCN在照射后4 d下降约83%(t=3.968,P<0.01),10 d和14 d明显增加,分别为(39.5%±4.1%,t= 3.219,P<0.05)、(79.4%±7.50%, t= 6.708,P<0.001)。ALP的表达水平在7 d(79.7%±22.3%,t=6.257, P<0.001)和10 d(128.3%±6.1%,t= 4.340, P<0.01)时明显增加。X线照射后7 d成骨细胞Wnt3a、LPR5及TCF-4的mRNA表达水平分别增加1.7倍(t= 6.573, P<0.001)、1.1倍(t= 5.323, P<0.05)和1.4倍(t= 3.054, P<0.05);而磷酸化GSK-3β降低42.1%(t= 4.460, P<0.01),稳定活化形式β-Catenin(ABC,脱磷酸β-Catenin)增加1.9倍(t= 3.528, P<0.05)。应用Wnt/β-catenin特异性抑制剂XAV939可以阻断X射线照射导致的ALP表达水平及活性增加。
结论低剂量X线照射通过Wnt/β-catenin信号通路增加成骨细胞骨分化标志物的表达、促进其分化成熟。