RNA干扰敲减PIWIL1表达对人结肠癌细胞SW620增殖,粘附及侵袭能力影响

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qcxmh
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PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中mRNA表达水平,首次证实了在SW620细胞中,PIWIL1相对PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4,其表达水平最高(P(0.05).构建表达针对PIWIL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,并用Western印迹验证其达到较高的干扰效率.用脂质体将重组质粒转染入SW620细胞中,通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验及细胞侵袭转移实验,分别观察到其可抑制SW620细胞的生长、增殖、侵袭转移能力,增强了SW620细胞的粘附能力.提示PIWIL1可能在结肠癌发生、发展过程中发挥作用. PIWIL1, a member of the PIWI subfamily of AGO proteins, is specifically expressed in testes and plays an important role in stem cell self-renewal, RNA interference and translation regulation.In this study, real-time PCR was used to detect PIWI gene family The expression level of PIWIL1, PIWIL2, PIWIL3 and PIWIL4 in human colon cancer SW620 cells was the first time to confirm the expression level of PIWIL1 relative to PIWIL2, PIWIL3 and PIWIL4 in SW620 cells (P (0.05) The hairpin structure interfered with the recombinant plasmid of RNA and verified that it reached a higher interference efficiency by Western blotting.The recombinant plasmids were transfected into SW620 cells by lipofectamine.Through MTT assay, colony formation assay, cell aggregation assay and cell invasion and metastasis assay , Respectively observed that it can inhibit the growth, proliferation, invasion and metastasis of SW620 cells and enhance the adhesion of SW620 cells, suggesting that PIWIL1 may play a role in the occurrence and development of colon cancer.
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