【摘 要】
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背景:骨骼肌细胞移植于损伤心肌可以改善心脏功能,但大部分细胞在移植早期因损伤心肌的缺血及炎性氧化应激环境而发生死亡.研究证实通过细胞预处理或联合基因治疗可以改善移
【机 构】
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山西省长治医学院附属和平医院心内科,山西省长活市,046000华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科,心血管病研究所,湖北省武汉市,430022;Department of Cardiology,
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背景:骨骼肌细胞移植于损伤心肌可以改善心脏功能,但大部分细胞在移植早期因损伤心肌的缺血及炎性氧化应激环境而发生死亡.研究证实通过细胞预处理或联合基因治疗可以改善移植细胞的生存.目的:探讨人生长激素基因修饰的成肌细胞移植对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和心功能的影响.设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2007-05/2008 12在山西省长治医学院和华中科技大学同济医学院附属协和医院完成.材料:SD大鼠30只,随机分为3组:人生长激素组、绿色荧光蛋白组、模型对照组,10只,组.另取1-3 d龄SD乳鼠用于骨骼肌成肌细胞培养.pLghGHSN质粒、pLgGFPSN质粒由本实验室提供.方法:分别取携带人生长激素基因的pLghGHSN质粒和携带绿色荧光蛋白基因的对照质粒pLgGFPSN,用二步转染法转染E86和PT67包装细胞,G418筛选并扩增阳性克隆.各组大鼠均结扎左冠状动脉前降支制作心肌梗死模型,2周后人生长激素组将转染pLghGHSN的成肌细胞悬液150 μ L(含6×106个成肌细胞)分3点注射于心肌梗死区边缘,绿色荧光蛋白组同法注射等量转染pLgGFPSN的成肌细胞悬液,模型对照组沣射等体积无血清培养基.主要观察指标:细胞移植4周后,超声心动图和血流动力学检查各组心功能变化:苏木精一伊红染色检测心肌梗死面积,天狼星红染色检测胶原纤维容积分数:western blot法检测心肌组织Bax,Bcl-2,人生长激素和caspase3蛋白的表达.结果:与模型对照组比较,人生长激素组左室腔变小,左室游离壁厚度增加,左室舒张末期内径和左室收缩末期内径均显著减小(P<0.05),短轴缩短率显著增加(P<0.05).与绿色荧光蛋白组、模型对照组比较,人生长激素组大鼠左室压力最大上升速率、左室压力最大下降速率绝对值、左室收缩末压均显著升高(P<0.05),左室舒张末压显著降低(P<0.05):血清中类胰岛素样生长因子1质量浓度显著升高(P<0.05);心肌梗死面积明显减小(P<0.05);bax,caspase3蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平增加,人生长激素蛋白呈阳性表达.结论:人生长激素基因修饰的成肌细胞移植可以抑制心肌细胞凋亡,与单独成肌细胞移植相比能够更有效地缩小心肌梗死面积,更好地改善心肌梗死大鼠的心功能.
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