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【目的】寻找、鉴定与儿童急性白血病耐药相关的microRNA,为治疗耐药白血病探索新的途径。【方法】在不同的阿霉素(DOX)浓度下培养原代细胞K562/WT,建立三种不同浓度的耐药白血病细胞株K562/DOX。提取K562/WT及其耐药细胞株的RNA进行基因芯片检测、qRT-PCR等方法,初步筛选可能与白血病细胞耐药相关的microRNA。收集治疗前、治疗后骨髓完全缓解及早期复发的儿童急性白血病的骨髓样本,提取RNA检测筛查的白血病细胞耐药相关的microRNA的表达,进一步验证体外实验的结果。【结果】①在K562/DOX耐药细胞株,miR-20a、miR-188-3p、miR-214等microRNA表达上调,而miR-331-5p、miR-338-5p、miR-27a、miR-15a和miR-455-3等的表达明显下调。qRT-PCR进一步证实了上述结果,并且发现miR-331–5p和miR-27a的表达与P-gp的表达呈反向关系。②在复发的骨髓样本组(13例),miR-331–5p和miR-27a表达明显低于治疗前骨髓组(24例)和治疗后完全缓解组(11例),证明复发的儿童急性白血病耐药细胞存在miR-331-5p和miR-27a低表达。【结论】耐药白血病细胞存在microRNA差异性表达,其中miR-331–5p和miR-27a在耐药白血病细胞及复发的急性白血病细胞中低表达。推测miR-331-5p和miR-27a可能在儿童急性白血病耐药中起到重要作用。