【摘 要】
:
目的 构建人包皮成纤维细胞(HFF)酵母双杂交均一化cDNA文库,为研究弓形虫与宿主细胞间的相互作用及其入侵机制奠定基础. 方法 复苏、培养HFF细胞并提取细胞总RNA,采用SMART和
【机 构】
:
山东省医学科学院,山东省寄生虫病防治研究所,山东济宁272033
论文部分内容阅读
目的 构建人包皮成纤维细胞(HFF)酵母双杂交均一化cDNA文库,为研究弓形虫与宿主细胞间的相互作用及其入侵机制奠定基础. 方法 复苏、培养HFF细胞并提取细胞总RNA,采用SMART和LD-PCR合成ds cDNA,对其进行均一化处理后,利用SfiI酶切,酶切后的ds cDNA连接pGADT7-SfiI三阅读框表达载体,连接产物转化至大肠埃希菌HST08,构建cDNA初级文库,进行库容检测和插入片段的PCR鉴定.提取文库质粒转化至酵母Y187中,制备HFF细胞Y187酵母文库. 结果 HFF细胞总RNA的A260/A280值为2.02,1.5%琼脂糖凝胶电泳检测到28S和18S核糖体特异性条带且二者亮度之比为2∶1,提取的RNA完整、质量良好.3种读码框库容分别为1.4×106 CFU/ml、1.8×106 CFU/ml和2.0×106 CFU/ml,重组率为99%.cDNA文库外源基因插入片段长度700~2 000 bp.制备的HFF细胞酵母eDNA文库库容量为2.5×107 CFU/ml. 结论 构建的HFF细胞酵母双杂交cDNA文库具有较高的库容量和重组率,可用于弓形虫蛋白与HFF宿主细胞互作蛋白的筛选.
其他文献
本文通过模拟试验和化学分析的方法,研究了砖红壤上磷与土壤中有关元素的关系,结果表明,土壤中活性锰和活性铁与磷结合是造成磷素在该种土壤中被固定的特殊原因,而且锰对磷的
目的 研究安徽省江淮地区椎体结核流行特点,为椎体结核病防治提供依据. 方法 收集2015年6月-2018年12月医院收治的88例椎体结核患者资料.无菌采集患者椎体结核脓液、坏死骨组
为了解桐乡市社区女性梅毒感染情况及流行特点,对2009-2018年桐乡市濮院镇社区女性梅毒疫情报告资料进行了回顾性调查.2009-2018年濮院镇共报告女性梅毒379例,以Ⅰ、Ⅱ期和隐
本文通过在土壤中埋置砂滤管的方法研究有机物料在黑土中的分解规律.结果表明:不同积温条件影响有机物料分解速度,小麦和草木樨秸秆在低温下也易于分解,不利于土壤有机质的积
目的 克隆鲍曼不动杆菌二硫键形成蛋白C(DsbC)基因,制备重组DsbC蛋白,为研究其活性奠定基础. 方法 通过NCBI获得DsbC蛋白序列,分析其生物学性质.采用PCR方法扩增无信号肽DsbC
本文对上海近年来新建的延中、凯桥、华山、黄兴绿地和公路浦东龙东大道、远东大道沿线的景观绿地进行了土壤现状调查,结果表明:上海土壤主要为碱性和强碱性;EC值基本达标;有
本文以常规土壤测试法为参比,在石灰性土壤上采用Mehlich3通用浸提剂和常规浸提剂进行了相关研究.土壤有效态P、K、Cu、Zn、Mn等6种元素的比对分析,表明土壤中有效态M3法测定
本文对思茅地区43种80个有机肥料样品进行品质分析,按全省全国统一的4要素总分分级标准评级结果:一级5种占11.63%;二级20种占46.51%;三级17种占39.53%;无四级;五级1种占2.33%.思
本文对机车使用适应铁路跨越式发展的难点与对策进行了研究。文章分析了机车使用的现状;指出了机车使用适应铁路跨越式发展的难点;提出了机车使用适应铁路跨越式发展的对策。
本文对市场经济条件下改革调度日班计划工作进行了探讨。文章阐述了外部市场经济对铁路运输企业的冲击;指出了改革调度日班计划的紧迫性和必要性;提出了改革调度日班计划的设计