【摘 要】
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雷珠单抗含有5对二硫键,由于大肠埃希菌的胞质为还原环境,其二硫键不能正确配对折叠,从而形成无生物学活性的包涵体,且包涵体的变性与复性过程十分繁琐和低效.然而,大肠埃希
【机 构】
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上海多米瑞生物技术有限公司,上海201203上海多米瑞生物技术有限公司,上海201203;中国医药工业研究总院上海医药工业研究院,上海201203;
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雷珠单抗含有5对二硫键,由于大肠埃希菌的胞质为还原环境,其二硫键不能正确配对折叠,从而形成无生物学活性的包涵体,且包涵体的变性与复性过程十分繁琐和低效.然而,大肠埃希菌的周质空间含有二硫键氧化还原酶,能为二硫键的正确配对和折叠提供合适的氧化环境,使通过信号肽引导分泌至周质空间的雷珠单抗二硫键正确配对和折叠,从而具有良好的生物学活性.本研究构建了周质可溶表达的基因重组大肠埃希菌,在5L发酵罐的规模上,对高密度发酵过程中β-D-异丙基硫代半乳糖的浓度、补料速度、诱导温度及溶氧等关键参数进行探究,使雷珠单抗的表达量达到(360±4.24)mg/L,且纯化后得到的雷珠单抗具有良好的抗原结合活性.本研究建立的方法能够大幅度提高雷珠单抗的表达量,实现了在大肠埃希菌周质空间的高效表达,可为工业化提供参考.
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