【摘 要】
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谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶(glutamine:fructose-6-phosphate amidotransferase,GFAT)是己糖胺生物合成途径(HBP)中的限速酶,与蛋白质糖基化修饰密切相关.本研究克隆的柞
【机 构】
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大连理工大学生命科学与药学学院,辽宁盘锦124221;辽宁省海洋水产科学研究院,辽宁大连116023
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谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶(glutamine:fructose-6-phosphate amidotransferase,GFAT)是己糖胺生物合成途径(HBP)中的限速酶,与蛋白质糖基化修饰密切相关.本研究克隆的柞蚕GFAT基因(ApGFAT)CDS由2 022个碱基构成,编码674个氨基酸.将该基因连接到柞蚕杆状病毒转移载体pApM748BE后与ApNPV-Aph/egfp+共转染Tn-High Five细胞获得重组病毒.将重组病毒注射到柞蚕蛹体内,收集发病蛹血淋巴,用镍离子螯合柱纯化得到纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测表明,ApGFAT蛋白在柞蚕蛹体内得到成功表达,酶活力为0.978 μmoI/(min·mg).
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