【摘 要】
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目的将叠氮溴化丙锭(PMA)与实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)相结合定量检测畜禽肉类中活的沙门菌。方法通过优化光反应时间、PMA浓度等PMA作用条件,建立PMA-q PCR方法,构建
【机 构】
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东华大学化学化工与生物工程学院,上海市疾病预防控制中心
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目的将叠氮溴化丙锭(PMA)与实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)相结合定量检测畜禽肉类中活的沙门菌。方法通过优化光反应时间、PMA浓度等PMA作用条件,建立PMA-q PCR方法,构建重组质粒建立标准曲线,考察该方法的灵敏性、特异性,并将该方法用于定量检测未经增菌培养的畜禽肉类样品中的沙门菌。结果在PMA浓度为15μg/m L、曝光5 min的条件下可完全抑制样品中死菌DNA的扩增。建立的定量标准曲线循环阈值(Ct值)与质粒标准品模板的拷贝数呈良好线性关系(r2=0.997 9),最低可检出10拷贝/反应体系。所建立的PMAq PCR方法最低可检出21拷贝/μL沙门菌。采用PMA-q PCR检测人工染菌鸡肉样品,最低可检出103CFU/m L沙门菌。结论用PMA-q PCR方法可实现定量检测畜禽肉类样品中活的沙门菌,从而达到快速检测的目的。
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