论文部分内容阅读
目的:制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体(mAb),对其进行特性鉴定,为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础。方法:构建膜联蛋白Ⅰ基因480bp的原核表达载体pQE30ANXI,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,并用Ni—NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白。用纯化的膜联蛋白I作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化,制备抗膜联蛋白Ⅰ蛋白的单克隆抗体,用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定