【摘 要】
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[背景]环糊精糖基转移酶的分子动力学模拟较传统基因改造而言能有效提高改造效率,减少盲目性.[目的]探究环糊精糖基转移酶的催化专一性机理,为获得产γ-环糊精专一性更高的环
【机 构】
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北京航空航天大学生物与医学工程学院生物力学与力生物学教育部重点实验室 北京100191;中国科学院微生物研究所传感技术联合国家重点实验室 北京100101;北京航空航天大学生物医学工程高精尖创新中心
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[背景]环糊精糖基转移酶的分子动力学模拟较传统基因改造而言能有效提高改造效率,减少盲目性.[目的]探究环糊精糖基转移酶的催化专一性机理,为获得产γ-环糊精专一性更高的环糊精糖基转移酶提供高效突变菌株方法.[方法]通过分子对接和分子动力学模拟,获得3种产物类型CGTase与底物的对接模拟结构,并通过定点突变实验进行验证.[结果]分子动力学模拟结果显示a-和β-CGTase与十糖链在酶蛋白S1区域呈现闭合的形态,而γ-CGTase和十糖链在S1区域呈现更易于生成γ-环糊精的张开形态;3种CGTase与十糖链在相同位置存在氢键的氨基酸共有17个相对应位点,其中14个位点的氨基酸种类一致,不一致的3个氨基酸对应a-CGTase位点分别为Y89、D234和Y262.本研究对Y262位点进行定点突变和产物专一性实验,结果显示经过分子动力学预测的Y262L有助于提高产γ-CD专一性,从野生酶的13.7％提高到39.9％,y-环糊精产物比例提高了3倍.[结论]分子动力学模拟结果对于指导环糊精糖基转移酶的专一性内在机理具有一定的正向指导意义.
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