【摘 要】
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目的 构建靶向敲减KLF4基因的重组腺相关病毒载体，并应用于肺血管疾病，为后期研究肺血管KLF4基因敲减在肺动脉高压大鼠中的作用及相关分子机制奠定基础。方法 根据大鼠KLF4基因序列，设计针对大鼠特异性的siRNA序列，以pHBAAV-U6-MCS-CMV-EGFP作为空白载体，通过酶切技术构建带有GFP荧光标记的KLF4干扰腺病毒载体pHBAAV-r-KLF4 shRNA-GFP，行测序分析，并
【基金项目】
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国家自然科学基金（No:81960016,No:82260014）； 遵义医科大学博士科研启动资金项目[No：院字（2018）04号]；
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目的 构建靶向敲减KLF4基因的重组腺相关病毒载体，并应用于肺血管疾病，为后期研究肺血管KLF4基因敲减在肺动脉高压大鼠中的作用及相关分子机制奠定基础。方法 根据大鼠KLF4基因序列，设计针对大鼠特异性的siRNA序列，以pHBAAV-U6-MCS-CMV-EGFP作为空白载体，通过酶切技术构建带有GFP荧光标记的KLF4干扰腺病毒载体pHBAAV-r-KLF4 shRNA-GFP，行测序分析，并进行病毒扩增、纯化及滴度测定。本研究对长时间（3个月）接触香烟烟雾的大鼠进行气道注入AAV1-KLF4-shRNA的干预治疗，观察大鼠右心室收缩压、平均右心室压等血流动力学指标改变。结果 经测序检测显示，大鼠AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体构建成功。健康对照组、生理盐水模型组、对照病毒模型组、治疗干预组的右心室收缩压和平均右心室压比较，差异均有统计学意义（P ＜0.05）。结论 对长时间接触香烟烟雾的肺动脉高压模型大鼠应用AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体，能有效改善右心室收缩压和平均右心室压，该载体在相关疾病动物模型中应用有效，为后期顺利开展AAV1-KLF4-shRNA在肺动脉高压中的预防和治疗作用，以及相关分子机制的深入研究提供基础条件。
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