目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)在平滑肌微环境中发生分化后平滑肌标志性基因乙酰化水平的变化,以及组蛋白乙酰化修饰在干细胞分化中的作用及机制。方法 体外培养BMSCs和膀胱平滑肌细胞(BSMCs),选择同批次的第3代BMSCs,将与BSMCs共培养3d的BMSCs作为实验组,未经共培养的BMSCs作为对照组,采用RT-PCR检测两组BMSCs中平滑肌α肌动蛋白(α-SMA)、钙调节蛋白(Calponin)、平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)的表达丰度。采用功率为80%20次0.5s 8个循环的超声破碎实验组及对照组BMSCsDNA,H3K9抗体结合特定乙酰化位点,采用免疫共沉淀技术(Ch IP)沉淀BMSCs组蛋白乙酰化位点基因,接头PCR扩增所获基因,Real-timePCR检测所获基因中3种目的基因(α-SMA、Calponin、SM-MHC)的表达水平。结果 RT-PCR检测结果显示,实验组BMSCs中的平滑肌标志性基因(α-SMA、Calponin、SM-MHC)的m RNA表达水平较对照组明显增强[分别为0.176±0.003 vs. 0.070±0.002, 0.079±0.002vs. 0.051±0.003, 0.091±0.004 vs. 0.034±0.001],差异均有统计学意义。分光光度计检测ChIP后获得的DNA,结果表明H3K9乙酰化抗体沉淀所获DNA浓度高于IgG抗体,且实验组高于对照组(P<0.05)。Real-time PCR分析BMSCs分化前后目的基因组蛋白H3K9乙酰化水平,结果显示,BMSCs分化后,实验组的平滑肌标志性基因α-SMA、Calponin、SM-MHC的mRNA转录水平明显高于对照组[分别为9.26±5.03vs.1.01±0.05, 2.33±0.65 vs. 0.99±0.05, 2.63±0.37 vs. 1.00±0.03],差异均有统计学意义。结论 BSMCs在平滑肌微环境中其特定位点H3K9乙酰化程度的增加,促进了BMSCs向BSMCs的分化。