流式细胞术检测小鼠全血中人血小板方法的建立

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目的建立一种流式细胞术检测动物模型小鼠全血中人血小板(hPLTs)的方法。方法用CO2致死SCID小鼠,立即心脏穿刺取血,用EDTA抗凝小鼠全血,备用。无菌分离5mL人的单采血小板备用。用1%多聚甲醛固定hPLTs、小鼠全血及hPLTs/小鼠全血混合血液(V/V=1∶4),4℃过夜保存。用洗涤溶液(1%PBS+1%FBS)洗涤和重新悬浮血液,将实验分为阳性对照组、阴性对照组和实验组,用相应的样本与相应抗体反应,建立检测模板。将小鼠全血和hPLTs以1∶4比例混合,用小鼠全血以1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000和1∶100000按体积比稀释上述混合血液,固定,4℃过夜保存。用洗涤溶液洗涤并重新悬浮血液样本,在TruCOUNT试管中定量检测hPLTs,称为"血小板检测值"。用血细胞计数仪检测单采血小板中血小板浓度,称为"血小板期望值"。与血细胞计数仪检测到的"血小板期望值"成对比较,观察可靠的检测浓度范围。结果当血小板期望值介于3000~150000/μL时,与血小板检测值具有较好的线性关系。结论采用流式细胞仪方法,可以可靠地检测到hPLTs期望值介于3000~150000/μL浓度范围内混合在小鼠全血中的hPLTs。
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