【摘 要】
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目的 表达牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)多表位嵌合蛋白,并分析其免疫原性.方法 将已鉴定出的IBRV的gB、gC和gD抗原表位及破伤风毒素
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆163319;海南大学动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室,海南海口570228
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目的 表达牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)多表位嵌合蛋白,并分析其免疫原性.方法 将已鉴定出的IBRV的gB、gC和gD抗原表位及破伤风毒素通用T细胞表位P2分别以GGGGS及AAYAAY为linker进行串联连接,用DNASTAR Protean软件分析其抗原性,选择最佳连接组合化学合成嵌合蛋白基因序列.将合成的目的基因克隆至载体pET-28a(+),构建重组质粒pET-28a-P2-gB/gC/gD(GGGGS)和pET-28a-P2-gB/gC/gD(AAYAAY),转化至感受态E.coli BL21(DE3),表达重组蛋白,采用Ni-NTA Purification System纯化.将纯化蛋白与ISA206佐剂乳化,经后腿肌肉注射免疫中国白兔,100 μg/(mL·只),共免疫3次,每次间隔3周.初次免疫后21、42和63 d采血,分离血清,间接ELISA法检测抗体水平.结果 两种重组质粒经双酶切及测序鉴定,构建正确.重组蛋白P2-gB/gC/gD(GGGGS)和P2-gB/gC/gD(AAYAAY)在E.coli中均以包涵体形式表达,纯化后产量分别可达12.4和15.3 mg/L.重组蛋白P2-gB/gC/gD(AAYAAY)诱导白兔的血清抗体水平显著高于重组蛋白P2-gB/gC/gD(GGGGS),且差异有统计学意义(P＜ 0.05).结论 成功表达了IBRV多表位嵌合蛋白,且具有良好的免疫原性.
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