为建立同时检测PEDV、TGEV、PDCoV和PTV的四重荧光RT-PCR检测方法,本研究以PEDV的N基因、TGEV的S基因、PDCoV的M基因和PTV基因组5’非编码基因为检测对象,建立同时检测4种病毒的荧光RT-PCR检测方法。特异性试验表明,该方法可以特异扩增4种病毒的基因,对猪呼吸道冠状病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型都呈阴性反应。敏感性试验表明,PEDV、TGEV、PDCoV和PTV的最低核酸检出量分别为141拷贝、68拷贝、8拷贝和11拷贝。应用该方法对100份送检样品进行检测,其中PEDV、TGEV、PDCoV和PTV感染检出率分别为10%、6%、2%和55%。本研究建立的检测方法具有良好的特异性和敏感性,而且操作快速简便,可用于猪腹泻疫病的临床诊断和流行病学调查。