【摘 要】
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目的:构建sTACI胞外区与人IgG1 Fc的重组基因,并进行原核表达和纯化具有生物活性的融合蛋白。方法:通过普通PCR和重叠PCR法,获得sTACI-Fc重组基因,进而构建重组子pET28a-sTAC
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(“新型BAFF拮抗剂在系统性红斑狼疮中治疗作用的研究”,81273308)资助;2012天津大学大学生创新创业训练计划项目;天津大学第五批实验教学改革项目的资助~~
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目的:构建sTACI胞外区与人IgG1 Fc的重组基因,并进行原核表达和纯化具有生物活性的融合蛋白。方法:通过普通PCR和重叠PCR法,获得sTACI-Fc重组基因,进而构建重组子pET28a-sTACI-Fc,并转入E.coli BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达,采用蛋白A凝胶亲和柱进行纯化以及ELISA法检测其生物活性。结果:成功获得了sTACI-Fc的重组基因,pET28a-sTACI-Fc重组子,通过表达和纯化得该融合蛋白,且其能够与BAFF特异性结合,结合活力呈现剂量依赖性,浓度5ng/μl时,两者的吸附达饱和。结论:成功构建了基因大小为1 000bp的sTACI-Fc重组基因,并在原核系统中进行了可溶性表达,得大小约为40kDa的融合蛋白sTACI-Fc,体外实验证实在其浓度为5ng/μl时与BAFF的结合达饱和,为下一步的研究工作奠定了基础。
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