【摘 要】
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目的建立重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh EGF)生物学活性的检测方法,并与其他4种常见显色方法进行比较。方法参考《中国药典》三部(2015
【基金项目】
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中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金(2017B3)
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目的建立重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh EGF)生物学活性的检测方法,并与其他4种常见显色方法进行比较。方法参考《中国药典》三部(2015版)附录3528中3T3细胞/MTT显色法,建立rh EGF生物学活性的检测方法,去除细胞饥饿的步骤,并用10%SDS代替DMSO,同时对培养3T3细胞的PRIM1640培养液的胎牛血清浓度(0、2%、5%、10%)进行优化。采用优化方法及药典方法同时检测rh EGF标准品,对灵敏度、信噪比、线性及孔间变异度进行比较。分别采用优化方法、MTS显色法、CCK-8显色法、结晶紫显色法、Cell Titer-Glo显色法检测同批rh EGF供试品,比较各方法的检测结果。结果优化方法的灵敏度(半数有效浓度为2.84 IU/m L)、信噪比(1.40)、线性(R2>0.99)和孔间变异度(95%可信区间为1.576%~3.334%)均优于药典方法,且实验周期由6 d缩短为5 d。5种显色方法对rh EGF供试品的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),CCK-8显色法检测结果的变异系数(CV)最小(16.8%),结晶紫显色法的CV值最大(23.3%)。结论优化方法更适用于rh EGF制品的常规生物学活性检测,且与其他4种显色方法等效。
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