【摘 要】
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目的建立一种新型的交叉引物等温扩增技术(cross-primer amplification,CPA)检测组织中的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.Pylori),为临床诊断幽门螺杆菌感染提供快速、灵
【机 构】
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湛江中心人民医院科教科,东北大学生命科学与健康学院,沈阳爱地生物科技有限公司,广东医科大学附属医院临床医院研究中心
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金项目(31600739)国家自然科学基金青年科学基金项目(31601165);广东省自然科学基金博士启动项目(2016A030310358);广东省医学科学技术研究基金项目(B2016011)
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目的建立一种新型的交叉引物等温扩增技术(cross-primer amplification,CPA)检测组织中的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.Pylori),为临床诊断幽门螺杆菌感染提供快速、灵敏、有效的检测方法。方法针对幽门螺杆菌尿霉素B基因(UreB)为靶序列设计3套交叉引物等温扩增方法的特异性引物,随后对反应体系的扩增温度、Bst DNA聚合酶浓度和扩增时间进行优化;选取2株幽门螺杆菌与其他7株致病菌进行特异性和敏感性试验;以尿素呼气法(UBT)为参考标准,检验CPA法对75例临床胃黏膜组织样本中幽门螺旋菌的检测灵敏度。结果幽门螺杆菌反应最佳引物组合为HCPA-3,最优反应温度为62℃、Bst DNA聚合酶浓度为6 U、反应时间为60 min;建立的方法具有较好的特异性,且检测灵敏度为1.26×102 cfu/mL;75例临床胃黏膜组织样本进行检测结果显示,CPA方法共检测出阳性标本26例,检出率为34.57%,准确率为96.30%(26/27)。结论 CPA法是一种快速、简便且高灵敏性和特异性的诊断方法,为临床上快速诊断幽门螺杆菌奠定了基础。
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