【摘 要】
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目的:探析黄芪总苷抑制肝星状细胞活化的作用机制.方法:①以转化生长因子β1(TGF-β1,2.5 ng/ml)诱导人肝星状细胞株LX-2细胞活化,并给予不同浓度黄芪总苷(1.25、2.5、5、10
【机 构】
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上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所,肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海市中医临床重点实验室,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所,肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海市中医临床重点实
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目的:探析黄芪总苷抑制肝星状细胞活化的作用机制.方法:①以转化生长因子β1(TGF-β1,2.5 ng/ml)诱导人肝星状细胞株LX-2细胞活化,并给予不同浓度黄芪总苷(1.25、2.5、5、10、20、30、40 μg/ml).药物作用24 h后,Edu掺入法检测细胞增殖,筛选适合的药物浓度.②将LX-2细胞分为对照组、TGF-β1(2.5 ng/ml)组、TGF-β1+黄芪总苷(20 μg/ml)组、TGF-β1+SB431542(10 μmol/L)组.各组给予相应干预24 h后,PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、TGF-β1、miRNA-744基因表达;Western blot检测Col Ⅰ、TGF-β 受体Ⅰ(TβR Ⅰ)、Smad2、p-Smad2、Smad7的蛋白表达;免疫荧光检测纤维状肌动蛋白(F-actin)表达.③取细胞分别加入miRNA-744激动剂(50 nmol/L)、miRNA-744拮抗剂(100 nmol/L)或阴性对照试剂,构建相应的转染细胞.在3种体系的转染细胞,将细胞分为对照组、TGF-β1(2.5 ng/ml)组、TGF-β1+黄芪总苷(20 μg/ml)组、黄芪总苷(20μg/ml)组.各组给予相应干预24 h后,Edu掺入法检测细胞增殖,免疫荧光检测F-actin表达.结果:①20、30和40 μg/ml黄芪总苷可显著抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞增殖,选用20 μg/ml的剂量进行后续实验.②TGF-β1组细胞F-actin、α-SMA、Col Ⅰ、TGF-β1和TβR Ⅰ的表达以及p-Smad2/Smad2蛋白表达比值较对照组显著升高(P＜0.05,P＜0.01);而与TGF-β1组相比,TGF-β1+黄芪总苷组细胞F-actin、α-SMA、Col Ⅰ、TGF-β1和TβR Ⅰ的表达以及p-Smad2/Smad2蛋白表达比值显著降低(P＜0.05,P＜0.01).TGF-β1组细胞Smad7和miRNA-744的表达较对照组显著降低(P＜0.05,P＜0.01),而TGF-β1+黄芪总苷组细胞Smad7和miRNA-744的表达较TGF-β1组显著升高(P＜0.01).③与阴性对照组相比,miRNA-744拮抗剂作用可显著升高LX-2细胞的Edu阳性染色细胞占比和F-actin表达(P＜0.05),且对TGF-β1诱导的LX-2细胞具有相似效应.在miRNA-744拮抗剂构建的转染细胞,给予黄芪总苷协同干预后,Edu阳性染色细胞占比和F-actin表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:黄芪总苷通过上调miRNA-744表达,抑制TGF-β/Smad信号通路,进而抑制肝星状细胞活化.
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