【摘 要】
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目的探讨Smac类似物BV6泛素化对肺癌细胞A549迁移的影响及BV6泛素化诱导肺癌细胞A549迁移的机制。方法采用空载质粒(空白对照组)、BV6-flag质粒(BV6-flag组)、BV6-flag质粒分
【机 构】
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陕西省人民医院肿瘤内科; 西安交大第一附属医院胸外科;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81402506)~~
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目的探讨Smac类似物BV6泛素化对肺癌细胞A549迁移的影响及BV6泛素化诱导肺癌细胞A549迁移的机制。方法采用空载质粒(空白对照组)、BV6-flag质粒(BV6-flag组)、BV6-flag质粒分别与泛素HA-ub质粒(BV6-ub组)、泛素HA-K48质粒(BV6-K48组)和泛素HA-K63质粒(BV6-K63组)转染肺癌A549细胞。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测BV6 mRNA转录情况;免疫共沉淀和免疫印迹法(Western blot)检测BV6泛素化情况;Transwell小室法检测细胞迁移情况;Western blot和qRT-PCR检测NF-κB/p65蛋白和mRNA表达情况。结果转染后,BV6-flag组、BV6-ub组、BV6-K48组、BV6-K63组A549细胞中BV6 mRNA表达显著高于空白对照组(P<0.05);而各转染组间BV6 mRNA表达无统计学差异(P>0.05)。各转染组A549细胞中BV6都发生泛素化,且BV6-K63组泛素化水平最高。与空白对照组比较,BV6-flag、BV6-ub、BV6-K63组A549细胞迁移数显著增高(P<0.05);与BV6-flag组比较,BV6-ub组、BV6-K63组A549细胞迁移数显著增高(P<0.05)。与空白对照组比较,BV6-flag组、BV6-ub组、BV6-K48组、BV6-K63组A549细胞中NF-κB/p65蛋白和mRNA表达上调(P<0.05);与BV6-flag组比较,BV6-ub组、BV6-K63组A549细胞中NF-κB/p65蛋白和mRNA表达显著上调(P<0.05)。结论 Smac类似物BV6可能主要通过K63位点发生泛素化促进A549细胞中NF-κB/p65表达,诱导迁移的发生。
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