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摘要：目的 观察芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和内皮素-1（ET-1）变化的影响，探讨其阻抑COPD的机制。方法 Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组和芪蛭大、中、小剂量组，采用气管内滴注脂多糖（LPS）加烟熏法复制COPD大鼠模型，造模后第15日开始药物干预，第43日采用放射免疫法分别检测血清、BALF中IL-8、TNF-α、ET-1含量的变化。结果 与空白组比较，模型大鼠血清、BALF中TNF-α、IL-8、ET-1的含量显著升高（P<0.05）。与模型组比较，芪蛭大剂量组血清中TNF-α水平明显降低（P<0.05），芪蛭大、小剂量组血清IL-8水平明显降低（P<0.05），芪蛭中剂量组血清中ET-1含量显著降低（P<0.05），芪蛭中剂量组BALF中TNF-α的水平明显降低（P<0.05），芪蛭大、中、小剂量组BALF中IL-8的水平明显降低（P<0.05），芪蛭大、中剂量组BALF中ET-1含量显著降低（P<0.05）。结论 芪蛭皱肺颗粒对COPD大鼠肺组织具有保护作用，调节IL-8、TNF-α、ET-1含量可能是其干预COPD发生、发展的机制之一。
关键词：慢性阻塞性肺疾病；芪蛭皱肺颗粒；白细胞介素-8；肿瘤坏死因子-α；内皮素-1；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.010
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）12-0026-03
慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一组以气流受限为特征的肺部
疾病，气流受限不完全可逆，呈进行性发展，但可预防和治疗[1]。其发病机制尚未完全明了，目前普遍认为COPD以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征，这种慢性气道炎症是由非常复杂的相互作用的细胞因子构成的网络调控的[2]。我们前期研究表明，芪蛭皱颗粒可减轻模型大鼠肺部炎症反应，减少气
道痰液和分泌物，减轻肺间质水肿，增加平均肺泡数；减少肺组织胶原的沉积，从而改善肺部病变[3-4]。笔者通过检测COPD模型大鼠血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和内皮素-1（ET-1）含量的变化，进一步探讨芪蛭皱肺颗粒防治COPD的机制。
1 材料与方法
1.1 动物
SPF级Wistar大鼠60只，雌雄各半，体质量（200±20）g，购自甘肃中医学院，动物质量合格证编号：SCXK（甘）2004- 0006-0000005，SPF级实验室饲养。
1.2 药物
芪蛭皱肺颗粒由黄芪、水蛭、党参等药物组成，甘肃中医学院药物制剂室制备；固本咳喘片，浙江台州南峰药业生产，批号070504。
1.3 主要试剂与仪器
脂多糖（LPS）购自Sigma公司（批号L-2880）；兰州牌香烟（焦油量12 mg，烟气烟碱量0.8 mg，烟气一氧化碳量13 mg）购自甘肃烟草工业有限责任公司；TNF-α、IL-8、ET-1放免试剂盒购自北京福瑞生物工程公司（批号分别为20080823、20080825、20080828）；有机玻璃熏箱48 L（20 cm×40 cm×60 cm，自制）；电子分析天平FA2004N（上海精密科学仪器有限公司）；组织匀浆器（上海医疗器械公司）；离心机LXJ-80C（上海医疗器械公司）；721分光光度计（上海安泰分析仪器有限公司）。
1.4 分组与造模
SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组和芪蛭大、中、小剂量组，每组10只。COPD大鼠模型采用气管内滴注LPS加烟熏法复制[2]，分别于第1、14日气管内滴注LPS（0.1 mg/100 g），第2-13日、第15-28日每日上午在容积为48 L玻璃密闭箱内持续熏兰州牌香烟雾30 min，1支/只，每日1次。
1.5 给药
从造模第15日起，实验动物进行灌胃干预治疗，阳性对照组每日给予固本咳喘片（相当原药材0.324 g/kg），芪蛭小、中、大剂量组每日给予0.54、1.08、2.16 g原药材/kg芪蛭皱肺颗粒，空白组、模型组给予等体积生理盐水。每日上午灌胃1次，连续治疗28 d。所有动物共饲养42 d。第43日，股动脉采血，处死，收集标本。实验药物用量均按体表面积比率换算而来，用生理盐水配制药液，临床等效剂量为实验中剂量。
1.6 血清中白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α和内皮素-1含量测定
动物饲养第43日，股动脉取血，处死，分离血清，严格按试剂盒说明书操作，采用放射免疫法检测。
1.7 肺泡灌洗液中白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α和内皮素-1含量测定
动物饲养第43日，股动脉取血，处死，分离肺脏，夹闭右肺，用生理盐水灌洗左侧肺脏，反复2次，回收灌洗液，离心，取上清液，严格按试剂盒说明书操作，采用放射免疫法检测。
1.8 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示，多组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 芪蛭皱肺颗粒对模型大鼠血清中白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α和内皮素-1含量的影响
与空白组比较，模型组血清中TNF-α、IL-8、ET-1含量均升高（P<0.05）；与模型组比较，芪蛭大剂量组血清中TNF-α的含量明显降低（P<0.05），芪蛭小、大剂量组血清中IL-8含量明显降低（P<0.05），芪蛭中剂量组血清中ET-1含量显著降低（P<0.05）。见表1。 2.2 芪蛭皱肺颗粒对模型大鼠肺泡灌洗液中白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α和内皮素-1含量的影响
与空白组比较，模型组BALF中TNF-α、IL-8、ET-1含量均升高（P<0.05）；与模型组比较，芪蛭中剂量组BALF中TNF-α含量明显降低（P<0.05），芪蛭小、大剂量组BALF中IL-8含量降低明显（P<0.05），芪蛭中、大剂量组BALF中ET-1含量显著降低（P<0.05）。详见表2。
3 讨论
目前国内外研究普遍认为，COPD的病理基础是气道壁和肺实质的慢性炎症及结构改变，致气道重塑，最终导致气道管腔狭窄和进展性气流阻力增加。许多细胞因子参与了这一过程，互相促进，加速局部炎症的发生发展，最终导致气道结构的重塑和气流阻塞的形成[5]。TNF-α作为感染炎症及免疫应答体系中的重要介质，可促进炎症细胞黏附、游走和浸润，并释放大量活性氧自由基、蛋白水解酶、脂类介质及细胞因子，也可以直接作用于血管内皮细胞，影响其通透性，导致毛细血管渗漏，这些共同作用引起严重肺损伤，导致肺功能下降，同时TNF-α能进一步诱导IL-8的合成与释放，促进炎症反应、血管生成和组织纤维增生，造成气道重塑狭窄以加重肺损伤，导致肺功能降低[6]。有学者研究发现，COPD患者的痰液、肺泡灌洗液中炎性细胞总数及IL-8水平较正常人群明显升高，而且IL-8水平与细胞总数及中性粒细胞、巨噬细胞呈正相关，在COPD气道炎症的发生发展过程中发挥重要作用[7]。ET-1是一类由内皮细胞释放的21肽，具有强烈的收缩血管活性。在正常生理条件下，内皮细胞通过产生多种生物活性物质调节血管的紧张度和正常血管结构，而在缺氧条件下这种调节功能发生紊乱，一方面产生血管扩张物质和内皮衍生舒张因子减少，另一方面肺血管内皮释放的内皮衍生收缩因子增加，并且缺氧时内皮细胞受损，使许多有害物质直接作用于平滑肌细胞，这些都导致了肺血管反应异常和重建。在COPD发生发展过程中，气道炎症促使血管内皮细胞和气道上皮细胞释放ET-1，ET-1过多合成，又进一步加重了气道的炎症反应和组织损伤[8]。本研究显示，COPD模型大鼠血清、BALF中TNF-α、IL-8和ET-1的含量显著高于正常组，与以上文献报道结果相似。
COPD属于中医学“咳嗽”、“喘证”、“肺胀”等范畴，痰、瘀、虚是COPD的病机关键。芪蛭皱肺颗粒以黄芪益正托邪、水蛭逐瘀消癥而共为君药；党参培土生金，丹参活血补血，为臣药；五味子、麦冬补体助用，枳实开泄疏涤，共为佐药。诸药合用，标本兼治，虚实共调，共奏益气培元、化痰活血之功效。本研究发现，COPD大鼠经芪蛭皱肺颗粒治疗后，与模型组比较，芪蛭大剂量组血清中TNF-α含量明显降低，芪蛭小、大剂量组血清中IL-8含量降低明显，芪蛭中剂量组血清中ET-1含量显著降低，芪蛭中剂量组BALF中TNF-α含量明显降低，芪蛭小、大剂量组BALF中IL-8含量明显降低，芪蛭中、芪蛭大剂量组BALF中ET-1含量显著降低。提示芪蛭皱肺颗粒对COPD的发生、发展有一定的防治作用，调节血清、BALF中TNF-α、IL-8和ET-1的含量可能是其防治COPD的作用机制之一。
参考文献：
[1] 中华中医药学会内科分会肺系病专业委员会.慢性阻塞性肺疾病中医诊疗指南（2011版）[J].中医杂志，2012，53（1）：80-84.
[2] 刘忠.银杏叶提取物对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠ET-1、TGF-β1的影响[J].中国药房，2011，22（43）：4051-4053.
[3] 李金田，田永衍，梁晶，等.芪蛭皱肺无糖颗粒对COPD大鼠模型呼吸功能和肺组织形态影响的实验研究[J].北京中医药，2009，28（5）：380.
[4] 李金田，梁晶，田永衍，等.芪蛭皱肺无糖颗粒对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型小气道重塑的影响[J].中成药，2010，32（11）：1862.
[5] 黎媛.雾化吸入盐酸戊乙奎醚对急性加重期COPD患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平的影响[J].第四军医大学学报，2009，30（15）：1374.
[6] 杨永红，王导新.慢性阻塞性肺病患者血清TNF-α水平与肺功能的关系探讨[J].细胞与分子免疫学杂志，2010，26（9）：887-888.
[7] 王晓青.慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-8、IL-10、α-HBDH、CRP及NO水平的变化[J].细胞与分子免疫学杂志，2010，26（12）：1262-1263.
[8] 王传博，李泽庚，彭波，等.芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证模型大鼠NO、ET-1及FIB的影响[J].中华中医药杂志，2012，27（1）：91-93.
（收稿日期：2013-03-09，编辑：华强）
关键词：慢性阻塞性肺疾病；芪蛭皱肺颗粒；白细胞介素-8；肿瘤坏死因子-α；内皮素-1；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.010
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）12-0026-03
慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一组以气流受限为特征的肺部
疾病，气流受限不完全可逆，呈进行性发展，但可预防和治疗[1]。其发病机制尚未完全明了，目前普遍认为COPD以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征，这种慢性气道炎症是由非常复杂的相互作用的细胞因子构成的网络调控的[2]。我们前期研究表明，芪蛭皱颗粒可减轻模型大鼠肺部炎症反应，减少气
道痰液和分泌物，减轻肺间质水肿，增加平均肺泡数；减少肺组织胶原的沉积，从而改善肺部病变[3-4]。笔者通过检测COPD模型大鼠血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和内皮素-1（ET-1）含量的变化，进一步探讨芪蛭皱肺颗粒防治COPD的机制。
1 材料与方法
1.1 动物
SPF级Wistar大鼠60只，雌雄各半，体质量（200±20）g，购自甘肃中医学院，动物质量合格证编号：SCXK（甘）2004- 0006-0000005，SPF级实验室饲养。
1.2 药物
芪蛭皱肺颗粒由黄芪、水蛭、党参等药物组成，甘肃中医学院药物制剂室制备；固本咳喘片，浙江台州南峰药业生产，批号070504。
1.3 主要试剂与仪器
脂多糖（LPS）购自Sigma公司（批号L-2880）；兰州牌香烟（焦油量12 mg，烟气烟碱量0.8 mg，烟气一氧化碳量13 mg）购自甘肃烟草工业有限责任公司；TNF-α、IL-8、ET-1放免试剂盒购自北京福瑞生物工程公司（批号分别为20080823、20080825、20080828）；有机玻璃熏箱48 L（20 cm×40 cm×60 cm，自制）；电子分析天平FA2004N（上海精密科学仪器有限公司）；组织匀浆器（上海医疗器械公司）；离心机LXJ-80C（上海医疗器械公司）；721分光光度计（上海安泰分析仪器有限公司）。
1.4 分组与造模
SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组和芪蛭大、中、小剂量组，每组10只。COPD大鼠模型采用气管内滴注LPS加烟熏法复制[2]，分别于第1、14日气管内滴注LPS（0.1 mg/100 g），第2-13日、第15-28日每日上午在容积为48 L玻璃密闭箱内持续熏兰州牌香烟雾30 min，1支/只，每日1次。
1.5 给药
从造模第15日起，实验动物进行灌胃干预治疗，阳性对照组每日给予固本咳喘片（相当原药材0.324 g/kg），芪蛭小、中、大剂量组每日给予0.54、1.08、2.16 g原药材/kg芪蛭皱肺颗粒，空白组、模型组给予等体积生理盐水。每日上午灌胃1次，连续治疗28 d。所有动物共饲养42 d。第43日，股动脉采血，处死，收集标本。实验药物用量均按体表面积比率换算而来，用生理盐水配制药液，临床等效剂量为实验中剂量。
1.6 血清中白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α和内皮素-1含量测定
动物饲养第43日，股动脉取血，处死，分离血清，严格按试剂盒说明书操作，采用放射免疫法检测。
1.7 肺泡灌洗液中白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α和内皮素-1含量测定
动物饲养第43日，股动脉取血，处死，分离肺脏，夹闭右肺，用生理盐水灌洗左侧肺脏，反复2次，回收灌洗液，离心，取上清液，严格按试剂盒说明书操作，采用放射免疫法检测。
1.8 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示，多组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 芪蛭皱肺颗粒对模型大鼠血清中白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α和内皮素-1含量的影响
与空白组比较，模型组血清中TNF-α、IL-8、ET-1含量均升高（P<0.05）；与模型组比较，芪蛭大剂量组血清中TNF-α的含量明显降低（P<0.05），芪蛭小、大剂量组血清中IL-8含量明显降低（P<0.05），芪蛭中剂量组血清中ET-1含量显著降低（P<0.05）。见表1。 2.2 芪蛭皱肺颗粒对模型大鼠肺泡灌洗液中白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α和内皮素-1含量的影响
与空白组比较，模型组BALF中TNF-α、IL-8、ET-1含量均升高（P<0.05）；与模型组比较，芪蛭中剂量组BALF中TNF-α含量明显降低（P<0.05），芪蛭小、大剂量组BALF中IL-8含量降低明显（P<0.05），芪蛭中、大剂量组BALF中ET-1含量显著降低（P<0.05）。详见表2。
3 讨论
目前国内外研究普遍认为，COPD的病理基础是气道壁和肺实质的慢性炎症及结构改变，致气道重塑，最终导致气道管腔狭窄和进展性气流阻力增加。许多细胞因子参与了这一过程，互相促进，加速局部炎症的发生发展，最终导致气道结构的重塑和气流阻塞的形成[5]。TNF-α作为感染炎症及免疫应答体系中的重要介质，可促进炎症细胞黏附、游走和浸润，并释放大量活性氧自由基、蛋白水解酶、脂类介质及细胞因子，也可以直接作用于血管内皮细胞，影响其通透性，导致毛细血管渗漏，这些共同作用引起严重肺损伤，导致肺功能下降，同时TNF-α能进一步诱导IL-8的合成与释放，促进炎症反应、血管生成和组织纤维增生，造成气道重塑狭窄以加重肺损伤，导致肺功能降低[6]。有学者研究发现，COPD患者的痰液、肺泡灌洗液中炎性细胞总数及IL-8水平较正常人群明显升高，而且IL-8水平与细胞总数及中性粒细胞、巨噬细胞呈正相关，在COPD气道炎症的发生发展过程中发挥重要作用[7]。ET-1是一类由内皮细胞释放的21肽，具有强烈的收缩血管活性。在正常生理条件下，内皮细胞通过产生多种生物活性物质调节血管的紧张度和正常血管结构，而在缺氧条件下这种调节功能发生紊乱，一方面产生血管扩张物质和内皮衍生舒张因子减少，另一方面肺血管内皮释放的内皮衍生收缩因子增加，并且缺氧时内皮细胞受损，使许多有害物质直接作用于平滑肌细胞，这些都导致了肺血管反应异常和重建。在COPD发生发展过程中，气道炎症促使血管内皮细胞和气道上皮细胞释放ET-1，ET-1过多合成，又进一步加重了气道的炎症反应和组织损伤[8]。本研究显示，COPD模型大鼠血清、BALF中TNF-α、IL-8和ET-1的含量显著高于正常组，与以上文献报道结果相似。
COPD属于中医学“咳嗽”、“喘证”、“肺胀”等范畴，痰、瘀、虚是COPD的病机关键。芪蛭皱肺颗粒以黄芪益正托邪、水蛭逐瘀消癥而共为君药；党参培土生金，丹参活血补血，为臣药；五味子、麦冬补体助用，枳实开泄疏涤，共为佐药。诸药合用，标本兼治，虚实共调，共奏益气培元、化痰活血之功效。本研究发现，COPD大鼠经芪蛭皱肺颗粒治疗后，与模型组比较，芪蛭大剂量组血清中TNF-α含量明显降低，芪蛭小、大剂量组血清中IL-8含量降低明显，芪蛭中剂量组血清中ET-1含量显著降低，芪蛭中剂量组BALF中TNF-α含量明显降低，芪蛭小、大剂量组BALF中IL-8含量明显降低，芪蛭中、芪蛭大剂量组BALF中ET-1含量显著降低。提示芪蛭皱肺颗粒对COPD的发生、发展有一定的防治作用，调节血清、BALF中TNF-α、IL-8和ET-1的含量可能是其防治COPD的作用机制之一。
参考文献：
[1] 中华中医药学会内科分会肺系病专业委员会.慢性阻塞性肺疾病中医诊疗指南（2011版）[J].中医杂志，2012，53（1）：80-84.
[2] 刘忠.银杏叶提取物对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠ET-1、TGF-β1的影响[J].中国药房，2011，22（43）：4051-4053.
[3] 李金田，田永衍，梁晶，等.芪蛭皱肺无糖颗粒对COPD大鼠模型呼吸功能和肺组织形态影响的实验研究[J].北京中医药，2009，28（5）：380.
[4] 李金田，梁晶，田永衍，等.芪蛭皱肺无糖颗粒对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型小气道重塑的影响[J].中成药，2010，32（11）：1862.
[5] 黎媛.雾化吸入盐酸戊乙奎醚对急性加重期COPD患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平的影响[J].第四军医大学学报，2009，30（15）：1374.
[6] 杨永红，王导新.慢性阻塞性肺病患者血清TNF-α水平与肺功能的关系探讨[J].细胞与分子免疫学杂志，2010，26（9）：887-888.
[7] 王晓青.慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-8、IL-10、α-HBDH、CRP及NO水平的变化[J].细胞与分子免疫学杂志，2010，26（12）：1262-1263.
[8] 王传博，李泽庚，彭波，等.芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证模型大鼠NO、ET-1及FIB的影响[J].中华中医药杂志，2012，27（1）：91-93.
（收稿日期：2013-03-09，编辑：华强）