集落形成法和Western Blot法研究ELAC2的辐射增敏作用

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目的研究ELAC2基因对乳腺癌细胞MCF-7辐射敏感性的影响。方法利用脂质体转染法将ELAC2基因转入MCF-7细胞,同时设立未转染MCF-7和转染空载体的MCF-7/pcDNA3作为对照。RT-PCR法检测ELAC2基因的mRNA表达;集落形成法检测ELAC2基因对肿瘤细胞辐射敏感性的影响;Western Blot法检测ELAC2、FEN-1、MGMT、MRE11及Ku-70基因的蛋白表达水平。结果 ELAC2基因的mRNA和蛋白水平在转染细胞中表达明显增高。细胞接受0、0.5、1、2、4、6Gy的X射线照射后,ELAC2基因高表达使MCF-7细胞的剂量-效应曲线左移,细胞辐射敏感性增强。细胞经5Gy的X射线照射,ELAC2基因高表达未使MGMT蛋白和MRE11蛋白表达发生明显变化,而FEN-1蛋白及Ku-70蛋白表达水平显著下降。结论 ELAC2基因高表达使细胞辐射敏感性增高,其涉及的分子机制可能与ELAC2下调FEN-1蛋白及Ku-70蛋白表达水平有关。
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