实时定量RT-PCR监测慢性粒细胞白血病患者造血干细胞移植后bcr-abl mRNA水平

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目的 评价实时定量RT-PCR(Q-PCR)技术用于监测慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因造血干细胞移植(HSCT)疗效的意义.方法 采用基于TaqMan探针的Q-PCR技术检测112例CML患者HSCT后不同时间共316份骨髓标本bcr-abl mRNA的表达.bcr-abl mRNA水平以内参基因abl进行归一化.采用荧光原位杂交法(FISH)评估HSCT后是否达细胞遗传学完全缓解(CCyR).结果 Q-PCR实验可重复敏感度为5个拷贝.abl及bcr-abl基因CT值的批内差及批间差均<2.0%.HSCT后1个月开始持续处于CCyR状态的101例患者,中位跟踪时间为12(6~60)个月的289份标本表现为HSCT后各时间段均有一定数量患者可检测出bcr-abl mRNA,总体上随着HSCT时间延长,中位水平逐渐降低.HSCT后1个月中位bcr-abl水平为0.035%(0~0.406%),较本室资料初治CML慢性期患者中位水平降低3个对数级,3个月时为0.006%(0~0.683%),6个月开始降至0%(0~0.225%),移植6个月后标本最高bcr-abl水平为0.068%.8例患者HSCT后未达CCyR或遗传学复发时bcr-abl水平为0.12%~13.45%,其中5例患者遗传学复发前的1份标本(复发前1~2个月)bcr-abl水平为0.09%~3.42%.9例持续CCyR患者bcr-abl水平曾经>0.090%,但随后均下降至0.2例急变期患者HSCT后1.6和3个月内持续CCyR,但分别于1个月和1.5个月后进展为血液学复发,bcr-abl水平亦从0及0.140%分别急剧增至46.900%和75.900%.结论 Q-PCR技术精确、可靠,对CML患者HSCT后有必要定期系列监测bcr-abl水平,以及时了解病情变化.对急变期患者需要更密切的监测.
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