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目的
探讨细胞水平的雄激素受体(AR)基因敲除方法,为前列腺疾病AR通路的功能研究提供细胞株材料。
方法通过在线软件设计针对AR的sgRNA靶向序列,将设计好的sgRNA靶序列克隆到PX330载体中并测序验证。将克隆好的CRISPR-AR载体转染T293细胞,提取DNA,PCR产物酶切和测序鉴定基因敲除效率。
结果CRISPR-AR载体测序证明质粒载体构建成功,293T细胞转染和酶切鉴定实验证明CRISPR-AR载体具有95.3%的敲除效率。
结论基于CRISPR/Cas9技术构建的CRISPR-AR载体可用于细胞的AR基因敲除,可进一步构建AR基因敲除的细胞株。