Exendin-4真核表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达

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目的:构建Exendin-4基因真核表达载体,并在巴斯德毕赤酵母GSl15中进行表达,为大量获得Exendin-4奠定基础。方法:采用重叠聚合酶链反应法扩增出Exendin-4的完整序列,将其亚克隆到表达载体pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K—Exendin-4。重组质粒经Sac Ⅰ线性化后用电穿孔法导入到GSl15中,经组氨酸缺陷筛选、G418高拷贝筛选及摇瓶表达筛选,甲醇诱导表达后用凝胶电泳法分析E。endin-4的表达。结果:序列测定结果表明成功地构建了毕赤酵母表达载体,电泳结果证明Exend
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