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摘 要：本实验对苦杏仁配方颗粒制备工艺和质量标准进行研究。最佳工艺为将苦杏仁浓缩膏相对密度为1.08（60摄氏度测）加热至60摄氏度，流速为每分钟70毫升，进风温度105～115摄氏度，出风温度60～70摄氏度。按最佳工艺制备三批样品，其成品收率高于原有工艺5%。该工艺连续生产的稳定性好，能够满足工业大生产的要求。
关键词：苦杏仁配方颗粒；工艺；质量标准
苦杏仁为蔷薇科植物山杏（苦杏）Prunus armeniaca L. var. ansu Maxim.、苦杏仁西伯利亚杏（山杏）Prunus sibirica L.、东北杏Prunus mandshurica （Maxim.） Koehne或杏Prunus armeniaca L.的干燥成熟种子。苦杏仁有小毒，归肺、大肠经。苦杏仁是个常用的止咳平喘药，其本身苦，所以它长于苦降肺气，用于咳喘，不管寒热虚实，也不分外感内伤，广泛配伍使用。《药性论》记载：“治腹痹不通，发汗，主温病。治心下急满痛，除心腹烦闷，疗肺气咳嗽，上气喘促。入天门冬煎，润心肺。可和酪作汤，益润声气。宿即动冷气。”苦杏仁具抗动脉粥样硬化、抗肾间质纤维化、抗肺纤维化、抗高氧诱导肺损伤、抗肿瘤、抗炎、免疫调节、抗肿瘤等药理作用[1-4]。本实验对苦杏仁配方颗粒制备工艺和质量标准进行研究。
1 仪器与试药
Dura 12/24超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；SYH实验室专用小型三维混合机（常州市永昌制粒干燥设备有限公司）；PTX-FA110万分之一天平（上海鑫仓电子科技有限公司）；一步制粒机（江阴市江中设备制造有限公司）；屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计（屹谱仪器制造（上海）有限公司）；SCQ-7201E双频加热型超声波清洗机（上海声彦超声波仪器有限公司）；S49-1旋振筛（新乡市鑫达振动设备有限公司）；LC3000高效液相色谱仪（山东滕州市滕海分析仪器有限公司）。苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（南京维之诚化学试剂有限公司）；甲醇（南京维之诚化学试剂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 苦杏仁提取膏的制备
取苦杏仁，精密称定，加水煎煮二次，第一次加12倍水煎煮1小時，第二次加10倍水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。
2.2 进料温度考察
一步制粒通常会采用加热提取膏来降低提取膏的粘性并缩短制粒时间。取三份苦杏仁浓缩膏，分别将苦杏仁浓缩膏加热至40摄氏度、50摄氏度、60摄氏度后进行制粒。采用40摄氏度苦杏仁浓缩膏制粒，浓缩膏粘度明显减低，收率为63%，制粒时间为71分钟；采用50摄氏度苦杏仁浓缩膏制粒，浓缩膏粘度明显减低，收率为75%，制粒时间为65分钟；采用60摄氏度苦杏仁浓缩膏制粒，浓缩膏粘度明显减低，收率为77%，制粒时间为60分钟。实验结果表明，三种温度下提取膏粘度都明显降低，采用60摄氏度浓缩膏制粒效果最好，所以选择60摄氏度浓缩膏制粒。
2.3 浸膏相对密度筛选
分别将苦杏仁浓缩膏浓缩至相对密度为1.06（60摄氏度测）、1.08（60摄氏度测）、1.10（60摄氏度测）、1.12（60摄氏度测），进行制粒。苦杏仁浓缩膏相对密度为1.06（60摄氏度测）时，喷雾效果较好，小颗粒多，收率为73%；苦杏仁浓缩膏相对密度为1.08（60摄氏度测）时，喷雾效果较好，颗粒均一，收率为80%；苦杏仁浓缩膏相对密度为1.10（60摄氏度测）时，喷雾效果较好，颗粒均一，收率为81%；苦杏仁浓缩膏相对密度为1.10（60摄氏度测）时，喷雾效果较好，大颗粒较多，收率为79%。实验结果表明苦杏仁浓缩膏相对密度为1.08（60摄氏度测）和1.10（60摄氏度测）时效果相当，所以选择苦杏仁浓缩膏相对密度为1.08（60摄氏度测）。
2.4 进料速度筛选
取板兰根回收膏相对密度为1.08（60摄氏度测）加热至60摄氏度，分别采用每分钟40毫升、每分钟50毫升、每分钟60毫升、每分钟70毫升的喷雾速度进行制粒。实验结果表明流速为每分钟70毫升时效果最好。
2.5 最佳工艺
最佳工艺为将苦杏仁浓缩膏相对密度为1.08（60摄氏度测）加热至60摄氏度，流速为每分钟70毫升，进风温度105～115摄氏度，出风温度60～70摄氏度。
3 质量标准研究
3.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[5]。色谱柱为迪马C18钻石色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）；甲醇-水（25∶75）为流动相；检测波长为210nm；流速1.0mL·min-1。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取苦杏仁苷对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含100μg的溶液，即得。
3.3 供试品溶液的制备
取供试品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10mL，密塞，精密称定重量，超声处理5分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，滤过。取续滤液，即得。
3.4 精密度试验
精密称取苦杏仁苷对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为100μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.83%，表明本方法精密度良好。
3.5 重现性试验
称取同一批的样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量并计算样品的RSD值，结果RSD为0.71%，结果表明此方法的重现性良好。
3.6 准确度试验
精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入苦杏仁苷对照品，按项下方法制备成120%、140%、160%。取模拟样品照试验方法试验，计算回收率为99.1%，RSD为0.96%。
4 工艺验证
按最佳工艺制备三批样品，其成品收率高于原有工艺5%。三批样品均符合标准。该工艺连续生产的稳定性好，能够满足工业大生产的要求。
参考文献
[1]连彦军，许天文，郑勇，柯茂林，李治，黄韬，陈道达.抗CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物/苦杏仁甙前药系统对裸鼠结直肠癌移植瘤的疗效观察[J].华中医学杂志，2005（01）.
[2]连彦军，陈道达，黄韬，柯茂林，许天文，郑勇斌.β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷诱导LoVo细胞凋亡及活性对Bax与bcl-2基因表达和Caspase-3的影响[J].肿瘤防治杂志，2005（06）.
[3]甘露.大鼠pEGFP-N1-BKβ1真核表达载体的构建及苦杏仁苷对支气管平滑肌细胞增殖的研究[D].华中科技大学，2007.
[4]祝华平，常立文，李文斌，刘汉楚，容志惠.苦杏仁甙对高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型细胞表面活性物质蛋白A、B、C mRNA表达的影响[J].中华围产医学杂志，2004（04）.
[5]李海龙，王静，张英春，金鸿道，刘术明，郝东海.HPLC-ELSD法测定苦杏仁中苦杏仁苷的含量[J].食品与发酵工业，2007（01）.
关键词：苦杏仁配方颗粒；工艺；质量标准
苦杏仁为蔷薇科植物山杏（苦杏）Prunus armeniaca L. var. ansu Maxim.、苦杏仁西伯利亚杏（山杏）Prunus sibirica L.、东北杏Prunus mandshurica （Maxim.） Koehne或杏Prunus armeniaca L.的干燥成熟种子。苦杏仁有小毒，归肺、大肠经。苦杏仁是个常用的止咳平喘药，其本身苦，所以它长于苦降肺气，用于咳喘，不管寒热虚实，也不分外感内伤，广泛配伍使用。《药性论》记载：“治腹痹不通，发汗，主温病。治心下急满痛，除心腹烦闷，疗肺气咳嗽，上气喘促。入天门冬煎，润心肺。可和酪作汤，益润声气。宿即动冷气。”苦杏仁具抗动脉粥样硬化、抗肾间质纤维化、抗肺纤维化、抗高氧诱导肺损伤、抗肿瘤、抗炎、免疫调节、抗肿瘤等药理作用[1-4]。本实验对苦杏仁配方颗粒制备工艺和质量标准进行研究。
1 仪器与试药
Dura 12/24超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；SYH实验室专用小型三维混合机（常州市永昌制粒干燥设备有限公司）；PTX-FA110万分之一天平（上海鑫仓电子科技有限公司）；一步制粒机（江阴市江中设备制造有限公司）；屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计（屹谱仪器制造（上海）有限公司）；SCQ-7201E双频加热型超声波清洗机（上海声彦超声波仪器有限公司）；S49-1旋振筛（新乡市鑫达振动设备有限公司）；LC3000高效液相色谱仪（山东滕州市滕海分析仪器有限公司）。苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（南京维之诚化学试剂有限公司）；甲醇（南京维之诚化学试剂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 苦杏仁提取膏的制备
取苦杏仁，精密称定，加水煎煮二次，第一次加12倍水煎煮1小時，第二次加10倍水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。
2.2 进料温度考察
一步制粒通常会采用加热提取膏来降低提取膏的粘性并缩短制粒时间。取三份苦杏仁浓缩膏，分别将苦杏仁浓缩膏加热至40摄氏度、50摄氏度、60摄氏度后进行制粒。采用40摄氏度苦杏仁浓缩膏制粒，浓缩膏粘度明显减低，收率为63%，制粒时间为71分钟；采用50摄氏度苦杏仁浓缩膏制粒，浓缩膏粘度明显减低，收率为75%，制粒时间为65分钟；采用60摄氏度苦杏仁浓缩膏制粒，浓缩膏粘度明显减低，收率为77%，制粒时间为60分钟。实验结果表明，三种温度下提取膏粘度都明显降低，采用60摄氏度浓缩膏制粒效果最好，所以选择60摄氏度浓缩膏制粒。
2.3 浸膏相对密度筛选
分别将苦杏仁浓缩膏浓缩至相对密度为1.06（60摄氏度测）、1.08（60摄氏度测）、1.10（60摄氏度测）、1.12（60摄氏度测），进行制粒。苦杏仁浓缩膏相对密度为1.06（60摄氏度测）时，喷雾效果较好，小颗粒多，收率为73%；苦杏仁浓缩膏相对密度为1.08（60摄氏度测）时，喷雾效果较好，颗粒均一，收率为80%；苦杏仁浓缩膏相对密度为1.10（60摄氏度测）时，喷雾效果较好，颗粒均一，收率为81%；苦杏仁浓缩膏相对密度为1.10（60摄氏度测）时，喷雾效果较好，大颗粒较多，收率为79%。实验结果表明苦杏仁浓缩膏相对密度为1.08（60摄氏度测）和1.10（60摄氏度测）时效果相当，所以选择苦杏仁浓缩膏相对密度为1.08（60摄氏度测）。
2.4 进料速度筛选
取板兰根回收膏相对密度为1.08（60摄氏度测）加热至60摄氏度，分别采用每分钟40毫升、每分钟50毫升、每分钟60毫升、每分钟70毫升的喷雾速度进行制粒。实验结果表明流速为每分钟70毫升时效果最好。
2.5 最佳工艺
最佳工艺为将苦杏仁浓缩膏相对密度为1.08（60摄氏度测）加热至60摄氏度，流速为每分钟70毫升，进风温度105～115摄氏度，出风温度60～70摄氏度。
3 质量标准研究
3.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[5]。色谱柱为迪马C18钻石色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）；甲醇-水（25∶75）为流动相；检测波长为210nm；流速1.0mL·min-1。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取苦杏仁苷对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含100μg的溶液，即得。
3.3 供试品溶液的制备
取供试品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10mL，密塞，精密称定重量，超声处理5分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，滤过。取续滤液，即得。
3.4 精密度试验
精密称取苦杏仁苷对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为100μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.83%，表明本方法精密度良好。
3.5 重现性试验
称取同一批的样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量并计算样品的RSD值，结果RSD为0.71%，结果表明此方法的重现性良好。
3.6 准确度试验
精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入苦杏仁苷对照品，按项下方法制备成120%、140%、160%。取模拟样品照试验方法试验，计算回收率为99.1%，RSD为0.96%。
4 工艺验证
按最佳工艺制备三批样品，其成品收率高于原有工艺5%。三批样品均符合标准。该工艺连续生产的稳定性好，能够满足工业大生产的要求。
参考文献
[1]连彦军，许天文，郑勇，柯茂林，李治，黄韬，陈道达.抗CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物/苦杏仁甙前药系统对裸鼠结直肠癌移植瘤的疗效观察[J].华中医学杂志，2005（01）.
[2]连彦军，陈道达，黄韬，柯茂林，许天文，郑勇斌.β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷诱导LoVo细胞凋亡及活性对Bax与bcl-2基因表达和Caspase-3的影响[J].肿瘤防治杂志，2005（06）.
[3]甘露.大鼠pEGFP-N1-BKβ1真核表达载体的构建及苦杏仁苷对支气管平滑肌细胞增殖的研究[D].华中科技大学，2007.
[4]祝华平，常立文，李文斌，刘汉楚，容志惠.苦杏仁甙对高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型细胞表面活性物质蛋白A、B、C mRNA表达的影响[J].中华围产医学杂志，2004（04）.
[5]李海龙，王静，张英春，金鸿道，刘术明，郝东海.HPLC-ELSD法测定苦杏仁中苦杏仁苷的含量[J].食品与发酵工业，2007（01）.