【摘 要】
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目的 初步确定汉坦病毒GM04-38株N-联糖基化位点在细胞融合中的作用.方法 采用基因定点突变技术将汉坦病毒GM04-38株G1片段上N134、N235、N347、N399四位点及G2片段上N928位点共5个位点上的天冬酰胺置换为丙氨酸.转染Vero E6细胞后,间接免疫荧光(IFA)检测蛋白表达,荧光显微镜观察IFA结果;Western blot检测蛋白的表达情况.采用Giemsa染色法观察细
【机 构】
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250012,济南,山东大学公共卫生学院病毒学研究室,山东省疾病预防控制中心免疫预防管理所,250012,济南,山东大学公共卫生学院病毒学研究室,250012,济南,山东大学公共卫生学院病毒学研究室,
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目的 初步确定汉坦病毒GM04-38株N-联糖基化位点在细胞融合中的作用.方法 采用基因定点突变技术将汉坦病毒GM04-38株G1片段上N134、N235、N347、N399四位点及G2片段上N928位点共5个位点上的天冬酰胺置换为丙氨酸.转染Vero E6细胞后,间接免疫荧光(IFA)检测蛋白表达,荧光显微镜观察IFA结果;Western blot检测蛋白的表达情况.采用Giemsa染色法观察细胞融合现象.结果 在Vero E6细胞中成功表达出糖蛋白,Western blot显示除134位点未显示G1片段外,各突变体均表达出G1、G2片段.IFA显示天冬酰胺突变前后各位点均显示荧光信号,呈核周分布.突变后134位点与928位点的突变体融合现象消失,其余各位点突变后融合现象仍然存在.结论 G1上的134位点可能与蛋白正确折叠有密切关系,134位点突变极可能导致蛋白的错误折叠,进而无法转运出内质网.G2上的928位点对细胞融合有重要作用,提示汉坦病毒融合肽很有可能位于G2上。
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