【摘 要】
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目的:获得NF-κBp50亚基同源结构域(RHD)cDNA及构建酵母双杂交系统的“饵”载体,并检测靶基因的酵母细胞毒性及自主报告基因的活性.方法:提取人外周血单个核细胞(PBMC)的总RN
【机 构】
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第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室,重庆,400042济南军区第153中心医院普通外科,河南,郑州,450042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室,重庆,400042;
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目的:获得NF-κBp50亚基同源结构域(RHD)cDNA及构建酵母双杂交系统的“饵”载体,并检测靶基因的酵母细胞毒性及自主报告基因的活性.方法:提取人外周血单个核细胞(PBMC)的总RNA,以RT-PCR扩增NF-κBp50亚基RHD基因片段,重组入酵母双杂交载体pGBKT7中.应用乙酸锂法,将重组质粒转化酵母细胞AH109,在SD/-Trp选择培养基上培养,观察转化株的生长情况;用滤膜影印法验证靶基因有无自主报告基因的活性.结果:经酶切及PCR鉴定,重组质粒中插入片段的大小与预期的结果相符.测序结果表明,其基因序列正确,无读码框移位,命名为pGBKT7-p50.转化酵母细胞后,对酵母细胞无毒性也无自主报告基因的活性.结论:pGBKT7-p50可作为酵母双杂交系统中的“饵”载体,用于后续的肽库筛选,捕捉与靶基因相互作用的多肽.
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