大鼠Smad6慢病毒干扰载体的构建与鉴定

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目的构建大鼠Smad6基因的慢病毒干扰载体,并在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)中验证其基因沉默效率。方法针对大鼠Smad6基因设计、合成两对Smad6-shRNA干扰序列,并将其重组到pLKO.1质粒载体中。测序验证后在HEK293T细胞内组装慢病毒。最后体外分离培养大鼠BMSC,通过慢病毒感染将Smad6干扰序列转导到细胞内,实时荧光定量聚合酶链式反应(PcR)及Western蛋白印迹法检测其对Smad6基因的干扰效率。结果成功构建并包装2个大鼠Smad6基因干扰的慢病毒载体和慢病毒。与阴性对照组比较
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