【摘 要】
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目的:观察miR-218对肺癌细胞生物学行为的影响并探讨其可能的作用机制.方法:收集62例肺癌患者癌组织及癌旁正常组织,qRT-PCR和免疫组化方法检测miRNA-218、LASP1和TGF-β的表达情况;通过脂质体转染法转染肺癌细胞系A549,从而构建miRNA-218过表达细胞模型及空载体组,并以A549细胞作为空白对照组;观察过表达miRNA-218对A549细胞生物学行为的影响,采用CCK-8法检测过表达miRNA-218对A549细胞增殖的影响;通过划痕实验及Transwell侵袭实验检测过表达
【机 构】
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重庆市渝北区人民医院老年医学科,重庆401120;重庆三峡中心医院呼吸与危重症医学科,重庆404000;重庆医科大学附属第二医院,重庆 404000
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目的:观察miR-218对肺癌细胞生物学行为的影响并探讨其可能的作用机制.方法:收集62例肺癌患者癌组织及癌旁正常组织,qRT-PCR和免疫组化方法检测miRNA-218、LASP1和TGF-β的表达情况;通过脂质体转染法转染肺癌细胞系A549,从而构建miRNA-218过表达细胞模型及空载体组,并以A549细胞作为空白对照组;观察过表达miRNA-218对A549细胞生物学行为的影响,采用CCK-8法检测过表达miRNA-218对A549细胞增殖的影响;通过划痕实验及Transwell侵袭实验检测过表达miRNA-218对A549细胞侵袭和迁移能力的影响;StarBase数据库及荧光素酶报告基因实验检测miRNA-218与LASP1的靶向关系;Western blot法检测细胞转染前后LASP1、TGF-β及Smad蛋白的表达.结果:qRT-PCR结果显示,肺癌组织中miRNA-218的表达水平低于正常组织,且与患者肿瘤浸润深度(P=0.004)、肿瘤大小(P=0.005)、淋巴结转移(P=0.014)以及TNM分期(P=0.021)密切相关,肺癌组织LASP1和TGF-β阳性表达率高于正常组织(P<0.05);相比于未转染的空白对照组,转染miRNA-218的细胞增殖、侵袭、迁移能力显著降低(P<0.05),空载体组与空白对照组比较无显著差异.StarBase数据库及荧光素酶报告基因实验结果显示miRNA-218与LASP1存在靶向关系.与空白对照组相比,转染miRNA-218的A549肺癌细胞LASP1、TGF-β及Smad蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),空载体组的表达水平无明显变化.结论:miRNA-218可能通过靶向抑制LASP1蛋白的表达,进而调控TGF-β/Smad信号通路,从而抑制肺癌细胞的侵袭和迁移.
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