基因-病毒治疗系统CNHK200-hA的构建及体外初步研究

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目的 构建一种结合抗肿瘤新生血管生成的基因治疗与病毒治疗优势的新型肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK200-hA.方法克隆人抗血管生成基因Angiostatin(k1-5),命名为hA.利用病毒重组技术将hA插入肿瘤特异性增殖病毒的病毒基因组中,通过病毒增殖试验、电镜技术、Western blot分析、鸡胚尿囊膜试验(CAM),观察CNHK200-hA的复制情况、hA基因的表达及其对新生血管生成的抑制作用.结果构建了一种新型的基因-病毒治疗系统CNHK200-hA.该治疗系统为E1b 55×103蛋白缺失而保留了腺病毒E1a蛋白的5型腺病毒,能在肿瘤细胞内大量增殖及复制,而在正常细胞内增殖能力较弱,从而特异性杀灭肿瘤细胞.同时CNHK200-hA携带人抗肿瘤新生血管生成基因hA,能在肿瘤细胞内高效表达hA蛋白,其表达量高于传统基因治疗的腺病毒载体系统.电镜证实该治疗系统可在肺癌A549细胞株中复制及增殖.CAM试验证实该治疗系统感染肺癌细胞后的培养液上清具有抗新生血管生成的生物活性.结论基因-病毒治疗系统CNHK200-hA能在肿瘤细胞中增殖复制,并明显提高hA基因的表达量,表达产物具有抑制新生血管形成的作用。

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