【摘 要】
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目的 以截短型乙肝核心抗原基因(SHBc 1-144aa)为载体进行HCV预防性疫苗的实验性研究.方法首先,体外合成的方式分别合成带有HCV B表位(1384-1405aa)及不具有该表位的的截短型
【机 构】
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台州学院医学院,浙江台州,318000;浙江中医药大学,浙江,杭州,310053;河北医科大学,河北,石家庄,050017
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目的 以截短型乙肝核心抗原基因(SHBc 1-144aa)为载体进行HCV预防性疫苗的实验性研究.方法首先,体外合成的方式分别合成带有HCV B表位(1384-1405aa)及不具有该表位的的截短型1-144位HBc基因SHBcB和SHBc,并将其与质粒pcDNA3.1进行基因重组,构建成质粒pcDNA3.1-SHBc-B和pcDNA3.1-SHBc.其后,以GFP为报告基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1-SHBc-GFP,转染Hela细胞,共聚焦显微镜观察GFP表达情况,从而分析SHBc作为疫苗表达载体的可行性.最后,将pcDNA3.1-SHBc-B在JM109中进行表达,蔗糖不连续密度梯度离心提取纯化表达产物SHBcAg-B,该蛋白以pcDNA3.1-SHBc表达产物SHBcAg作对照,免疫Balb/C鼠.适时进行脾及外周血中T细胞亚群检测(FACS)、淋巴细胞胞内IL-4和IFN-γ检测(FACS),以观察SHBcAg-B的免疫原性.结果共聚焦显微镜观察到GFP的成功表达;SHBcAg-B免疫组小鼠胞内IL-4高于对照组,流式散点图亦显示SHBcAg-B免疫组小鼠血和脾中CD4+细胞所占比例明显增高,SHBcAg-B免疫组胞内IFN-γ的值则正相反.结论 SHBcAg可作为疫苗的免疫栽体,重组蛋白SHBcAg-B诱导出高水平的体液免疫应答,可作为HCV预防性疫苗的候选.本实验为HCV预防性疫苗的研制奠定了基础.
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